森言森語
今天是今年第一次提DNA痕届，不知道為什么，今天加完異丙醇之后直接出現(xiàn)了大量肉眼可見的絮狀沉淀（DNA）徘公，神奇的是之前太多次提DNA從來沒有在這一步出現(xiàn)如此大量的絮狀沉淀牲证，往往是在加完異丙醇在-20℃預(yù)冷沉淀，離心之后才有肉眼可見的絮狀沉淀步淹。然后下午繼續(xù)后面的無腦步驟時从隆，不禁再次問自己，提DNA的原理到底是什么缭裆？提RNA的原理又是什么键闺？之間的聯(lián)系和區(qū)別又在哪里？說實話澈驼，讓我一板一眼的說DNA提取的原理辛燥，我還真說不上來，有點扎心缝其。既然我說不清楚挎塌，那就很有必要查一查，重新學(xué)習(xí)一下内边。其實我很好奇榴都，如果畢業(yè)答辯的時候被老師提問了這個問題，幾人能說清楚漠其，哈哈……注意事項：
實驗室常用試劑幾乎都有毒嘴高，尤其DNA提取過程中涉及到的試劑也有很強毒性，接觸后會對身體造成不同程度的影響和傷害和屎，長期操作不規(guī)范將對身體造成極大的安全威脅拴驮。因此，為了自己和他人的生命安全和身體健康柴信，以下所有步驟均應(yīng)在佩戴后口罩和手套后套啤，在通風(fēng)櫥操作。DNA提取的要求：
- 保證結(jié)構(gòu)的完整性随常；
- 盡量排除其他大分子成分的污染（蛋白質(zhì)潜沦、多糖及RNA等）萄涯；
- 保證提取樣品中不含對酶有抑制作用的有機溶劑及高濃度的金屬離子。
提取步驟及原理：
主要提一下CTAB法提取植物基因組DNA原理唆鸡。
1 將植物組織置于2 mL離心管窃判，加入2顆滅菌鋼珠，液氮冷凍喇闸，球磨儀研碎袄琳；
2 加入800 μL CTAB提取緩沖液，65℃水浴1 h燃乍，期間每隔15 min顛倒混勻若干次唆樊；
說明：CTAB（十六烷基三甲基溴化銨，Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide）刻蟹，是一種陽離子去污劑逗旁，可溶解細(xì)胞膜并能與核酸形成復(fù)合物，具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性舆瘪。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物片效，只是不能沉淀核酸.通過有機溶劑抽提，去除蛋白英古、多糖淀衣、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。
Tris-HCl
提供緩沖環(huán)境召调，防止核酸被破壞膨桥。
EDTA
抑制DNase活性。
NaCl
提供高鹽環(huán)境唠叛，使DNA充分溶解只嚣。
β-巰基乙醇
抗氧化劑，去除酚艺沼、糖册舞，能與酚形成絡(luò)合物，也可與糖結(jié)合障般。
3 加入800 μL苯酚：氯仿：異丙醇（25:24:1）调鲸，上下顛倒混勻，12000 rpm離心10 min剩拢，將上層水相轉(zhuǎn)移至新的2 mL離心管线得；
說明：苯酚：從水相中抽提變性的蛋白質(zhì)饶唤，抑制DNase的降解作用徐伐；氯仿：加速有機相和水相分層，去除殘留酚募狂；異戊醇：減少蛋白質(zhì)變性操作過程中產(chǎn)生的起泡办素。4 加入等體積氯仿：異丙醇（24:1）角雷，上下顛倒混勻，12000 rpm離心10 min性穿，將上清轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管勺三；
說明：原理同上一步，抽提更徹底需曾。
5 加入0.6倍體積異丙醇吗坚，-20℃沉淀30 min以上；
說明：異丙醇用來沉淀DNA呆万，沉淀所需體積小商源，但難揮發(fā)。
6 12000 rpm離心10 min谋减，棄去上清牡彻，加入75%乙醇洗滌兩次；
說明：其實乙醇也可用于DNA的沉淀出爹，其雖易揮發(fā)庄吼，但所需體積大，因此普遍使用異丙醇沉淀严就，然后用乙醇洗滌除去殘留的異丙醇总寻。另外，DNA不溶于乙醇梢为，但CTAB和一些蛋白質(zhì)可溶废菱，低溫乙醇還可抑制DNase活性，降低分子運動抖誉，易于DNA沉淀殊轴。
7 真空干燥儀干燥40 min左右，加水溶解DNA袒炉。
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