原理概述：
RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過程中內(nèi)源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解阵具。高濃度強變性劑異硫氰酸胍碍遍，可溶解蛋白質(zhì)，破壞細胞結(jié)構(gòu)阳液，使核蛋白與核酸分離怕敬，滅活RNA酶，所以RNA從細胞中釋放出來時不被降解趁舀。細胞裂解后赖捌，除了RNA，還有DNA矮烹、蛋白質(zhì)和細胞碎片越庇，可通過酚、氯仿等有機溶劑處理得到純化奉狈、完整的總RNA卤唉。
真核細胞中含有多種RNA，如rRNA仁期、mRNA桑驱、tRNA及一些小分子RNA。RNA以rRNA的數(shù)量最多跛蛋，占80%-85%熬的，tRNA及核內(nèi)小分子 RNA10%-15%，而mRNA分子占1%-5%赊级。
核酸提取原則：
⑴ 保證核酸的完整性押框；
⑵ 獲得高純度的核酸；
⑶ 操作簡便理逊，穩(wěn)定性強橡伞。
一盒揉、利用TRNzol Universal總RNA提取試劑
TRNzol Universal 是在TRNzol 基礎(chǔ)上研發(fā)的含有指示劑的總RNA 提取試劑。該產(chǎn)品具有更強的裂解能力兑徘，更高的靈敏度刚盈，可從病毒、細菌挂脑、真菌藕漱、動物和植物細胞、組織最域、體液等樣本中提取總RNA 的試劑谴分。TRNzol Universal 能夠充分裂解樣本、溶解細胞內(nèi)含物镀脂，并有效抑制RNase 活性牺蹄，提取樣本中的總RNA，同時保證了提取過程中RNA 的完整性薄翅。該試劑對樣本起始量無限制沙兰，一個小時內(nèi)即可完成反應。
自備試劑
氯仿翘魄、異丙醇鼎天、無菌水、75%乙醇（用無菌水配制）Prepare
1.5ml離心管暑竟、計時器斋射、液氮、研缽但荤、鑷子罗岖、渦旋振蕩器、低溫離心機腹躁、超微量分光光度計-
注意事項：
圖片來自TIANGEN官網(wǎng).png Steps
⑴ 取0.1g新鮮菌絲于液氮中快速研磨成粉末桑包，轉(zhuǎn)入1.5mL滅菌冷凍離心管中；
⑵ 渦旋混勻纺非，室溫靜置5min哑了；
⑶ 加入200μl氯仿，劇烈振蕩15sec烧颖，室溫放置3min弱左；
⑷ 4℃ 12,000rpm離心15 min。樣品會分成三層：粉色的有機相炕淮，中間層和上層無色的水相科贬，RNA主要在水相中，把水相約500 μl轉(zhuǎn)移至新的1.5mL離心管中；
⑸ 在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇榜掌，混勻，室溫放置10 min乘综；
⑹ 4℃ 12,000 rpm離心10 min憎账，去上清。離心前RNA沉淀經(jīng)常是看不見的卡辰，離心后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀胞皱；
⑺ 加入1 ml 75%乙醇洗滌沉淀；
⑻ 4℃ 10,000 rpm 離心2min九妈，倒出液體反砌，剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出萌朱；
⑼ 室溫放置3min晾干沉淀宴树；
⑽ 加入30-50μl RNase-Free ddH2O，反復吹打晶疼、混勻酒贬，充分溶解RNA（冰上進行）。
Min point ：
異硫氰酸胍裂解細胞翠霍，使得RNase失活锭吨；同時使得核酸蛋白復合物分離，將RNA釋放到溶液中寒匙；
酸性酚-氯仿抽提零如，低pH值的酚使RNA進入水相，蛋白和DNA留在有機相
苯酚和脂類溶于有機溶劑氯仿中形成有機相锄弱；由于氯仿密度較大考蕾，使得有機相位于下層，而水相在上層
異丙醇：沉淀RNA
乙醇：沉淀RNA棵癣、除小分子辕翰、清除多余的有機溶劑
測定OD260/280=1.9~2.1
