Pacific Bioscience公司簡稱PacBio
讀長可達(dá)2-3萬個堿基挣柬，平均長度8千個。
Pacbio測序也是邊合成邊測序杖爽。
DNA polymor固定在玻璃底板上：首先在聚合酶上標(biāo)上生物素，在玻璃底板上標(biāo)上鏈酶親和素。利用生物素和鏈合親霉素的親和力結(jié)合在一起使碾。
加入帶四色熒光的dNTP引物，酶會長時間的抓住這個dNTP裹芝，激發(fā)光從底部照射進來部逮，能在較長時間內(nèi)發(fā)出熒光。一個循環(huán)完成后嫂易，焦磷酸基團掉落兄朋，進行第二輪，第三輪循環(huán)怜械。
小孔設(shè)計：小孔直徑70nm颅和。
PacBio文庫：DNA文庫呈啞鈴型。打開后即是一個圓形缕允，可以周而復(fù)始的測序峡扩。
判讀準(zhǔn)確率：87.5%，（錯誤的原因可能是多讀一個堿基障本，教届，錯誤是隨機的，多讀幾遍之后驾霜，這些偶然誤差是可以校正的案训。
PacBio讀長的限制因素：
1，DNA鏈上出現(xiàn)缺口粪糙，激發(fā)光較強會導(dǎo)致DNA鏈出現(xiàn)缺口强霎。
2，強光照射導(dǎo)致DNA酶變性蓉冈，導(dǎo)致測序過程終止城舞。
3，文庫本身長度寞酿，要做20-30k的文庫難度很大家夺。
測序復(fù)合物：聚合酶，測序引物伐弹，測序模板秦踪。
一個板上有15萬個小孔，由于測序復(fù)合物的隨機不均勻分布，約有1/3的孔是空的椅邓，1/3的孔是一個復(fù)合物柠逞，1/3的孔有兩個及以上的復(fù)合物。有效孔數(shù)約為5萬個景馁，產(chǎn)生的數(shù)據(jù)約為50000*8000=0.4G.
PacBio的優(yōu)勢：
1板壮，PacBio可以直接測堿基被修飾的狀態(tài)。如遇見甲基化的堿基合住，合成速度會放慢绰精，光譜特征會改變。
2透葛，建庫過程無需PCR,由于PCR過程中AT堿基比GC堿基復(fù)制速度快笨使，會導(dǎo)致最終AT的含量比較高，影響測序質(zhì)量僚害。GC bias少硫椰。
3，測序速度快：測序速度取決于酶反應(yīng)速度萨蚕，一秒3個堿基靶草。
