LAMP 反應原理

  1. 在60-65℃條件下,雙鏈DNA處于解旋與結(jié)合的不穩(wěn)態(tài)网棍,其中上游內(nèi)引物 FIP中的 F2序列區(qū)段首先與模板目標區(qū)段的單鏈 DNA中的 F2C結(jié)合,在Bst DNA聚合酶的作用下自 F2的3’ 末端延伸啟動鏈置換DNA合成绑青。
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  1. 外引物 F3則與模板 F3c結(jié)合并延伸,置換出由 FIP鏈接的互補單鏈 DNA祷舀,此單鏈的 F1c與 F1區(qū)段互補結(jié)構颠黎,可通過自我堿基配對形成環(huán)狀結(jié)構。
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  1. 以(2)中合成的5‘ 端有莖環(huán)狀結(jié)構的單聯(lián) DNA為模板惑畴,下游內(nèi)引物 BIP的B2序列區(qū)段與單鏈DNA模板的B2c結(jié)合,在Bst DNA聚合酶的作用下自 B2的3’ 末端延伸啟動鏈置換DNA合成。
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  1. 外引物 B3則與模板 B3c結(jié)合并延伸暂刘,置換出由 BIP鏈接的互補單鏈 DNA,此單鏈的 F1與 F1c區(qū)段互補捂刺,B1c與 B1區(qū)段互補谣拣,形成啞鈴狀結(jié)構的單鏈DNA。
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  1. 啞鈴狀結(jié)構以 3’ 末端的F1區(qū)段為起點叠萍,以自身為模板進行 DNA合成芝发。由此,啞鈴狀結(jié)構轉(zhuǎn)變?yōu)榍o環(huán)狀結(jié)構苛谷,LAMP擴增進入第二階段辅鲸。
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  1. 內(nèi)引物 FIP與(5)步形成莖環(huán)狀結(jié)構的處于局部單鏈狀態(tài)的莖環(huán) F2c區(qū)段結(jié)合啟動 DNA鏈置換合成,所合成并解離得到的單鏈 DNA部分也可以形成環(huán)狀結(jié)構腹殿。
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  1. 隨后(6)步形成的環(huán)狀結(jié)構以3’末端的B1區(qū)段為起點独悴, 以自身為模板,進行DNA合成延伸及鏈置換反應锣尉。形成1個啞鈴狀結(jié)構的單鏈 DNA和1個新莖環(huán)狀結(jié)構的 DNA刻炒。
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  1. 下游內(nèi)引物 BIP上的 B2可與(7)步形成的2個莖環(huán)狀結(jié)構的局部處于單鏈狀態(tài)的莖環(huán)B2c區(qū)段結(jié)合 DNA鏈置換合成。
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  1. 類似的反應將無限重復自沧。
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