@凍春卷 春卷菌，我又來了，細胞算是養(yǎng)起來了绘沉，做了WB背景是干凈的，CCK8也顯示和WT增殖無統(tǒng)計學差異征堪，我終于差不多要開始正式實驗了
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強前言： 挑選到滿意的sgRNA之后测秸，就要開始正式實驗敦捧，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講扫责，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆榛鼎。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑逃呼、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 還是改成6孔板了鳖孤，春卷菌，直接一個基因一塊6孔板
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強前言： 挑選到滿意的sgRNA之后抡笼，就要開始正式實驗苏揣，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆推姻。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑平匈、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 是的，看著細胞間的連接已經(jīng)變很遠了，我索性換成了6孔板增炭，但是感覺不同基因的在一個板子又怕弄混忍燥，現(xiàn)在換成了6cm皿，希望能好一點隙姿，按道理此前能夠單克隆化梅垄，應該會存活才對呀，都21天了输玷，還沒能繼續(xù)往下做實驗队丝，一直在養(yǎng)細胞。
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強前言： 挑選到滿意的sgRNA之后欲鹏，就要開始正式實驗机久，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆赔嚎。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑膘盖、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 春卷菌，我又來了尤误，我的單克隆有了衔憨，但是現(xiàn)在擴大到T25總是長得非常非常非常慢，而且壓根長不滿袄膏，不知道有沒有什么好辦法可以解決這個問題呢践图？目前已經(jīng)用上20%GIBCO FBS了，其他的不是GIBCO的沉馆，培養(yǎng)瓶那些也不是corning的码党，不知道這些有沒有什么影響呢？
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強前言： 挑選到滿意的sgRNA之后斥黑，就要開始正式實驗揖盘，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆锌奴。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑兽狭、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 不呢，RD和293T只是拿來練手用??鹿蜀。春卷菌箕慧，96孔板的好壞是不是也會影響到單細胞的存活呢？
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@凍春卷 感謝春卷菌粉渠，我現(xiàn)在試了RD，293T和FHC圾另，都不怎么活霸株，很頭大
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@凍春卷 害呀箫攀，那么久了還是沒有成功，挑選后單細胞不長了就死了幼衰，然后6月1重新又挑了
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@凍春卷 好的好的识椰，感謝春卷菌绝葡，等我回趟家回來把鋪好的96孔板里的細胞用槍頭挑到新板子里試一下
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春卷菌愉阎，我又來了，今天試了下消化后稀釋到10^3個/ML力奋，然后取100ul加到20ml后取200ul至96孔板榜旦，2h后去看發(fā)現(xiàn)每個孔里面哪只1個??，如果是不帶熒光的細胞景殷，方法三操作性怎么樣呢溅呢？太難了這操作
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗猿挚，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講咐旧，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑亭饵、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 感謝春卷菌休偶！我后續(xù)需要用到這個細胞做類器官，小老板讓挑單克隆辜羊。那等我今天傳代的兩孔長好我還是最佳濃度去養(yǎng)他們踏兜，再養(yǎng)個一周就挑試一下。從去年就看春卷菌的簡書八秃，受益匪淺碱妆！后面疫情走讀生不讓進校不了了之，今年2月中旬才開始做實驗昔驱，每天的實驗少但過程真是漫長疹尾！后續(xù)有問題繼續(xù)請教春卷菌，再次感謝骤肛！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后纳本，就要開始驗證敲除，除了蛋白表達水平的檢測腋颠，最終還是要看測序結(jié)果繁成。關(guān)于測序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
@凍春卷 感謝春卷菌淑玫！我后面思索了下應該要包含sgRNA在內(nèi)的擬敲除基因序列的上下500bp巾腕，看到文獻多是500bp上下的PCR產(chǎn)物，又有指出600-700bp較好絮蒿，我選擇了后者尊搬，這點不知道春卷同學是否有更好的指導呢？目前還在多克隆階段土涝，有文獻指出佛寿，對照細胞死亡后，以1/4-1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選3周但壮，也有文獻說對照死亡后待細胞狀態(tài)良好后繼續(xù)最佳puro濃度加壓篩選20天狗准。我現(xiàn)在以不到1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選了11天了，長很滿茵肃，今早一個孔傳了兩個孔腔长，計劃是一個孔先凍一點，另外一個孔傳代24h后繼續(xù)不到1/2最佳puro濃度篩選下去验残，直到匯合度80以上后開始單克隆的挑選了捞附，不知是否合適。希望春卷菌能指導下您没，再次感謝鸟召！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除氨鹏，除了蛋白表達水平的檢測欧募，最終還是要看測序結(jié)果。關(guān)于測序的方案也是各有不同仆抵，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
春卷同學跟继，打擾了种冬，有個問題想要請教下，挑完單克隆后的PCR擴增中的引物我看文獻是說以sgRNA為中心上下500bp去設(shè)計引物舔糖，這里包括sgRNA那一段在里面么娱两？還是說跳開sgRNA，只拿它的上下500bp設(shè)計引物呢金吗？PCR產(chǎn)物送測的時候按你在評論說的十兢，拿這個PCR單邊引物給公司測序就好么？期待回復摇庙！再次感謝旱物！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除卫袒，除了蛋白表達水平的檢測宵呛，最終還是要看測序結(jié)果。關(guān)于測序的方案也是各有不同玛臂，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
簡介和前期文章 我對之前的所有教程進行了再次詳細的總結(jié) 前言： 每當我們接觸新事物時烤蜕，都忍不住問如下圖所示之哲學三問（當然有時候問的是，這是什么迹冤？可以吃嗎讽营？怎么做？）： 由于...
SQL(Structured Query Language, 結(jié)構(gòu)化查詢語言)是用于訪問和處理數(shù)據(jù)庫的標準的計算機語言，也是數(shù)據(jù)清洗的神器堪藐。 日常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析工作中莉兰，80%...
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R從excel文件中讀取日期數(shù)據(jù)經(jīng)常出現(xiàn)錯誤（如, 日期數(shù)據(jù)讀入之后變成整數(shù)，或者整數(shù)與標準的日期格式共存等）模捂，這種情況大多是數(shù)據(jù)讀入R之前數(shù)據(jù)類型保存有誤（有些日期類型...
