梁蛋蛋

@凍春卷 春卷菌密浑，我又來了桑滩，細胞算是養(yǎng)起來了，做了WB背景是干凈的，CCK8也顯示和WT增殖無統(tǒng)計學差異定欧，我終于差不多要開始正式實驗了

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講荧库，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑赵刑、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 還是改成6孔板了分衫，春卷菌，直接一個基因一塊6孔板

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后般此，就要開始正式實驗蚪战，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講牵现，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑邀桑、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 是的瞎疼，看著細胞間的連接已經(jīng)變很遠了，我索性換成了6孔板壁畸，但是感覺不同基因的在一個板子又怕弄混贼急，現(xiàn)在換成了6cm皿，希望能好一點捏萍，按道理此前能夠單克隆化太抓，應該會存活才對呀，都21天了令杈，還沒能繼續(xù)往下做實驗走敌，一直在養(yǎng)細胞。

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前言： 挑選到滿意的sgRNA之后逗噩，就要開始正式實驗掉丽，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆异雁。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑机打、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 春卷菌，我又來了片迅，我的單克隆有了残邀，但是現(xiàn)在擴大到T25總是長得非常非常非常慢，而且壓根長不滿柑蛇，不知道有沒有什么好辦法可以解決這個問題呢芥挣？目前已經(jīng)用上20%GIBCO FBS了，其他的不是GIBCO的耻台，培養(yǎng)瓶那些也不是corning的空免，不知道這些有沒有什么影響呢？

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后盆耽，就要開始正式實驗蹋砚，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆摄杂。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑坝咐、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 不呢，RD和293T只是拿來練手用??析恢。春卷菌墨坚，96孔板的好壞是不是也會影響到單細胞的存活呢？

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前言： 挑選到滿意的sgRNA之后映挂，就要開始正式實驗泽篮，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講盗尸，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑帽撑、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 感謝春卷菌泼各，我現(xiàn)在試了RD，293T和FHC亏拉，都不怎么活扣蜻，很頭大

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗专筷，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆蒸苇。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑磷蛹、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 害呀，那么久了還是沒有成功溪烤，挑選后單細胞不長了就死了味咳，然后6月1重新又挑了

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗檬嘀，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講槽驶，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑鸳兽、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 好的好的掂铐，感謝春卷菌，等我回趟家回來把鋪好的96孔板里的細胞用槍頭挑到新板子里試一下

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后揍异，就要開始正式實驗全陨，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆衷掷。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑辱姨、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

春卷菌，我又來了戚嗅，今天試了下消化后稀釋到10^3個/ML雨涛，然后取100ul加到20ml后取200ul至96孔板，2h后去看發(fā)現(xiàn)每個孔里面哪只1個??懦胞，如果是不帶熒光的細胞替久，方法三操作性怎么樣呢？太難了這操作

CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強

前言： 挑選到滿意的sgRNA之后躏尉，就要開始正式實驗侣肄，而正式實驗中細胞轉(zhuǎn)染部分我則不會再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆醇份。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑稼锅、儀器：轉(zhuǎn)染試...

凍春卷

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梁蛋蛋

@凍春卷 感謝春卷菌吼具！我后續(xù)需要用到這個細胞做類器官，小老板讓挑單克隆矩距。那等我今天傳代的兩孔長好我還是最佳濃度去養(yǎng)他們拗盒，再養(yǎng)個一周就挑試一下。從去年就看春卷菌的簡書锥债，受益匪淺陡蝇！后面疫情走讀生不讓進校不了了之，今年2月中旬才開始做實驗哮肚，每天的實驗少但過程真是漫長登夫！后續(xù)有問題繼續(xù)請教春卷菌，再次感謝允趟！

CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后恼策，就要開始驗證敲除，除了蛋白表達水平的檢測潮剪，最終還是要看測序結(jié)果涣楷。關(guān)于測序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...

凍春卷

29373 97 40

梁蛋蛋

@凍春卷 感謝春卷菌抗碰！我后面思索了下應該要包含sgRNA在內(nèi)的擬敲除基因序列的上下500bp狮斗，看到文獻多是500bp上下的PCR產(chǎn)物，又有指出600-700bp較好弧蝇，我選擇了后者碳褒，這點不知道春卷同學是否有更好的指導呢？目前還在多克隆階段看疗，有文獻指出骤视，對照細胞死亡后，以1/4-1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選3周鹃觉，也有文獻說對照死亡后待細胞狀態(tài)良好后繼續(xù)最佳puro濃度加壓篩選20天专酗。我現(xiàn)在以不到1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選了11天了，長很滿盗扇，今早一個孔傳了兩個孔祷肯，計劃是一個孔先凍一點，另外一個孔傳代24h后繼續(xù)不到1/2最佳puro濃度篩選下去疗隶，直到匯合度80以上后開始單克隆的挑選了佑笋，不知是否合適。希望春卷菌能指導下斑鼻，再次感謝蒋纬！

CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除，除了蛋白表達水平的檢測蜀备，最終還是要看測序結(jié)果关摇。關(guān)于測序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...

凍春卷

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梁蛋蛋

春卷同學碾阁，打擾了输虱，有個問題想要請教下，挑完單克隆后的PCR擴增中的引物我看文獻是說以sgRNA為中心上下500bp去設計引物脂凶，這里包括sgRNA那一段在里面么宪睹？還是說跳開sgRNA，只拿它的上下500bp設計引物呢蚕钦？PCR產(chǎn)物送測的時候按你在評論說的亭病，拿這個PCR單邊引物給公司測序就好么？期待回復嘶居！再次感謝罪帖！

CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除食听，除了蛋白表達水平的檢測胸蛛，最終還是要看測序結(jié)果污茵。關(guān)于測序的方案也是各有不同樱报，由于之前選用的是CRISPR-Ca...

凍春卷

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梁蛋蛋

SQL(Structured Query Language, 結(jié)構(gòu)化查詢語言)是用于訪問和處理數(shù)據(jù)庫的標準的計算機語言陋桂，也是數(shù)據(jù)清洗的神器逆趣。 日常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析工作中，80%...

梁蛋蛋

SQL(Structured Query Language, 結(jié)構(gòu)化查詢語言)是用于訪問和處理數(shù)據(jù)庫的標準的計算機語言嗜历，也是數(shù)據(jù)清洗的神器宣渗。 日常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析工作中，80%...

梁蛋蛋

R從excel文件中讀取日期數(shù)據(jù)經(jīng)常出現(xiàn)錯誤（如, 日期數(shù)據(jù)讀入之后變成整數(shù)梨州，或者整數(shù)與標準的日期格式共存等）痕囱，這種情況大多是數(shù)據(jù)讀入R之前數(shù)據(jù)類型保存有誤（有些日期類型...