@凍春卷 春卷菌，我又來了，細(xì)胞算是養(yǎng)起來了问潭，做了WB背景是干凈的，CCK8也顯示和WT增殖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，我終于差不多要開始正式實(shí)驗(yàn)了
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實(shí)驗(yàn)布持，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆陕悬。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑题暖、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 還是改成6孔板了，春卷菌墩莫，直接一個(gè)基因一塊6孔板
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后芙委，就要開始正式實(shí)驗(yàn)，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講狂秦，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆灌侣。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 是的裂问，看著細(xì)胞間的連接已經(jīng)變很遠(yuǎn)了侧啼，我索性換成了6孔板牛柒，但是感覺不同基因的在一個(gè)板子又怕弄混，現(xiàn)在換成了6cm皿痊乾，希望能好一點(diǎn)皮壁，按道理此前能夠單克隆化，應(yīng)該會(huì)存活才對(duì)呀哪审，都21天了蛾魄，還沒能繼續(xù)往下做實(shí)驗(yàn)，一直在養(yǎng)細(xì)胞湿滓。
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后滴须，就要開始正式實(shí)驗(yàn)，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講叽奥，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆扔水。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 春卷菌朝氓，我又來了魔市，我的單克隆有了，但是現(xiàn)在擴(kuò)大到T25總是長得非常非常非常慢赵哲，而且壓根長不滿待德，不知道有沒有什么好辦法可以解決這個(gè)問題呢？目前已經(jīng)用上20%GIBCO FBS了誓竿，其他的不是GIBCO的磅网，培養(yǎng)瓶那些也不是corning的谈截，不知道這些有沒有什么影響呢筷屡？
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實(shí)驗(yàn)簸喂，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講毙死，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑喻鳄、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 不呢扼倘，RD和293T只是拿來練手用??。春卷菌除呵，96孔板的好壞是不是也會(huì)影響到單細(xì)胞的存活呢再菊？
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實(shí)驗(yàn)颜曾，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講纠拔，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑泛豪、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 感謝春卷菌稠诲，我現(xiàn)在試了RD侦鹏，293T和FHC，都不怎么活臀叙，很頭大
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后略水，就要開始正式實(shí)驗(yàn)，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講劝萤，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆渊涝。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 害呀床嫌，那么久了還是沒有成功驶赏，挑選后單細(xì)胞不長了就死了，然后6月1重新又挑了
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后既鞠，就要開始正式實(shí)驗(yàn)煤傍，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆嘱蛋。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑蚯姆、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 好的好的，感謝春卷菌洒敏，等我回趟家回來把鋪好的96孔板里的細(xì)胞用槍頭挑到新板子里試一下
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后龄恋，就要開始正式實(shí)驗(yàn)，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講凶伙，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆郭毕。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑、儀器：轉(zhuǎn)染試...
春卷菌函荣，我又來了显押，今天試了下消化后稀釋到10^3個(gè)/ML，然后取100ul加到20ml后取200ul至96孔板傻挂，2h后去看發(fā)現(xiàn)每個(gè)孔里面哪只1個(gè)??乘碑，如果是不帶熒光的細(xì)胞，方法三操作性怎么樣呢金拒？太難了這操作
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術(shù)哪家強(qiáng)前言： 挑選到滿意的sgRNA之后兽肤，就要開始正式實(shí)驗(yàn)，而正式實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞轉(zhuǎn)染部分我則不會(huì)再講绪抛，直接到最關(guān)鍵的部分：挑取單克隆资铡。 實(shí)驗(yàn)正文 1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 常規(guī)試劑、儀器：轉(zhuǎn)染試...
@凍春卷 感謝春卷菌幢码！我后續(xù)需要用到這個(gè)細(xì)胞做類器官笤休，小老板讓挑單克隆。那等我今天傳代的兩孔長好我還是最佳濃度去養(yǎng)他們蛤育，再養(yǎng)個(gè)一周就挑試一下宛官。從去年就看春卷菌的簡書葫松，受益匪淺！后面疫情走讀生不讓進(jìn)校不了了之底洗，今年2月中旬才開始做實(shí)驗(yàn)腋么，每天的實(shí)驗(yàn)少但過程真是漫長！后續(xù)有問題繼續(xù)請(qǐng)教春卷菌亥揖，再次感謝珊擂！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗(yàn)證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開始驗(yàn)證敲除费变，除了蛋白表達(dá)水平的檢測摧扇，最終還是要看測序結(jié)果。關(guān)于測序的方案也是各有不同挚歧，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
@凍春卷 感謝春卷菌扛稽！我后面思索了下應(yīng)該要包含sgRNA在內(nèi)的擬敲除基因序列的上下500bp，看到文獻(xiàn)多是500bp上下的PCR產(chǎn)物滑负，又有指出600-700bp較好在张，我選擇了后者，這點(diǎn)不知道春卷同學(xué)是否有更好的指導(dǎo)呢矮慕？目前還在多克隆階段帮匾，有文獻(xiàn)指出，對(duì)照細(xì)胞死亡后痴鳄，以1/4-1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選3周瘟斜，也有文獻(xiàn)說對(duì)照死亡后待細(xì)胞狀態(tài)良好后繼續(xù)最佳puro濃度加壓篩選20天。我現(xiàn)在以不到1/2最佳puro濃度繼續(xù)篩選了11天了痪寻，長很滿螺句，今早一個(gè)孔傳了兩個(gè)孔，計(jì)劃是一個(gè)孔先凍一點(diǎn)槽华，另外一個(gè)孔傳代24h后繼續(xù)不到1/2最佳puro濃度篩選下去壹蔓，直到匯合度80以上后開始單克隆的挑選了，不知是否合適猫态。希望春卷菌能指導(dǎo)下，再次感謝披摄！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗(yàn)證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后亲雪，就要開始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測疚膊，最終還是要看測序結(jié)果义辕。關(guān)于測序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
春卷同學(xué)寓盗，打擾了灌砖，有個(gè)問題想要請(qǐng)教下璧函，挑完單克隆后的PCR擴(kuò)增中的引物我看文獻(xiàn)是說以sgRNA為中心上下500bp去設(shè)計(jì)引物，這里包括sgRNA那一段在里面么基显？還是說跳開sgRNA蘸吓，只拿它的上下500bp設(shè)計(jì)引物呢？PCR產(chǎn)物送測的時(shí)候按你在評(píng)論說的撩幽，拿這個(gè)PCR單邊引物給公司測序就好么库继？期待回復(fù)！再次感謝窜醉！
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗(yàn)證敲除前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后宪萄，就要開始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測榨惰，最終還是要看測序結(jié)果拜英。關(guān)于測序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
簡介和前期文章 我對(duì)之前的所有教程進(jìn)行了再次詳細(xì)的總結(jié) 前言： 每當(dāng)我們接觸新事物時(shí)琅催，都忍不住問如下圖所示之哲學(xué)三問（當(dāng)然有時(shí)候問的是聊记，這是什么？可以吃嗎恢暖？怎么做排监？）： 由于...
SQL(Structured Query Language, 結(jié)構(gòu)化查詢語言)是用于訪問和處理數(shù)據(jù)庫的標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)算機(jī)語言舆床，也是數(shù)據(jù)清洗的神器。 日常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析工作中嫁佳，80%...
SQL(Structured Query Language, 結(jié)構(gòu)化查詢語言)是用于訪問和處理數(shù)據(jù)庫的標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)算機(jī)語言挨队，也是數(shù)據(jù)清洗的神器。 日常的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析工作中蒿往，80%...
R從excel文件中讀取日期數(shù)據(jù)經(jīng)常出現(xiàn)錯(cuò)誤（如, 日期數(shù)據(jù)讀入之后變成整數(shù)盛垦，或者整數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)的日期格式共存等），這種情況大多是數(shù)據(jù)讀入R之前數(shù)據(jù)類型保存有誤（有些日期類型...
