做實驗嘛,時間和精力的合理分配很重要勾邦,利用有限的時間高效完成各項實驗的準備工作就顯得尤其必要眷篇。畢竟需要把更多的時間花在研究文獻上面荔泳,然后仔細驗證實驗思路玛歌,最后快快的做實驗。
【進入正題】
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1创肥、主題
利用SnapGene進行各類載體的構建叹侄,并模擬目的基因的擴增昨登,載體的酶切,連接撒强,電泳檢測飘哨。
2得湘、示例(以下涉及到的載體和序列是隨便選取的,只為演示摆马,不具備實際的意義)
下面就以pET-32a(+)和擬南芥hsp20基因AT3G46230為例進行演示。
第一步:打開SnapGene述呐,并打開以上兩個文件乓搬。
第二步:針對AT3G46230进肯,設計選取擴增引物棉磨。這里的酶切位點就隨便選取BamHI和BglII。
同樣的操作,對下游引物進行選取抬吟。
這里沒有加保護堿基/同源臂
第三步:對目的基因進行擴增
擴增完成。
第四步:插入目的基因聪建。
到這一步發(fā)現(xiàn)有點問題刃鳄,剛才隨便選的兩個酶切位點中的BamHI是不可用的叔锐,是因為我們的目的基因中含有BamHI酶切位點的序列见秽。因此愉烙,通過檢查后步责,將上面提到的BamHI替換為SalI。并對引物等進行了更新遂鹊。由于重新更改和截圖比較費勁蔗包,就不對上面的圖片進行更改了。大家明白就行舟陆。
下面接著繼續(xù)耻矮。
下面就是融合了目的基因的質(zhì)粒裆装,可以看到目的基因已經(jīng)成功插入。
第五步:電泳檢測
比如毡琉,這里我們對插入的目的基因進行電泳檢測。
最后慧耍,保存質(zhì)粒圖片芍碧,或者保存為SnapGene文件号俐,以便日后再編輯。
結束吏饿。