自然殺傷（NK）細(xì)胞由獨(dú)特的先天淋巴樣細(xì)胞群組成，具有多種細(xì)胞毒性機(jī)制和通過(guò)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的能力纯陨，在抗癌免疫中扮演著關(guān)鍵角色[1]坛芽。在過(guò)去的五十年中，NK細(xì)胞的重要性和潛力得到了廣泛的研究[2]翼抠。最初是學(xué)術(shù)上的探索咙轩，現(xiàn)在已演變成前途光明的癌癥免疫療法領(lǐng)域。

NK-92細(xì)胞是一種白細(xì)胞介素2（IL-2）依賴性NK細(xì)胞系阴颖，來(lái)源于急性非霍奇金淋巴瘤分離的外周血單核細(xì)胞活喊。在眾多NK細(xì)胞中，NK-92細(xì)胞因其易于培養(yǎng)和擴(kuò)增的特性量愧，被視為“現(xiàn)成的”NK細(xì)胞過(guò)繼性免疫療法的候選者钾菊，同時(shí)NK-92細(xì)胞是首個(gè)獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)的進(jìn)行臨床試驗(yàn)的NK細(xì)胞[1]。但是研究者發(fā)現(xiàn)NK-92細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中通常功能耗竭偎肃，為了克服免疫抑制或增強(qiáng)NK細(xì)胞的腫瘤靶向識(shí)別煞烫，目前已開發(fā)多種方法。其中累颂，研究者可以利用基因編輯改造NK-92細(xì)胞以提高NK細(xì)胞適應(yīng)性和抗腫瘤能力[3]滞详。跟隨小源一起來(lái)看看凛俱，研究者是怎么對(duì)NK-92進(jìn)行改造的吧！

圖1 用于癌癥免疫治療的CRISPR/Cas9介導(dǎo)的NK細(xì)胞基因編輯示意圖[3]

武裝“CAR”的NK細(xì)胞

嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞（CAR-T cells）療法在治療白血病方面具有顯著的療效料饥，但其個(gè)性化的定制和高昂的費(fèi)用仍舊是個(gè)挑戰(zhàn)蒲犬，因此開發(fā)一種更經(jīng)濟(jì)且隨時(shí)可用的治療方法尤為重要。Guillermo等人[4]探究了CRISPR-Cas9技術(shù)改造的CAR-NK-92細(xì)胞在治療急性髓性白血舶斗取（AML）和急性B淋巴細(xì)胞白血苍！（B-ALL）中的潛力。首先巡蘸，NK-92細(xì)胞經(jīng)改造后表達(dá)特定的嵌合抗原受體（CAR）奋隶，能夠識(shí)別并靶向癌細(xì)胞。隨后敲除NK細(xì)胞上的免疫檢查點(diǎn)基因（CBLB, NKG2A, TIGIT）赡若，旨在提高NK-92細(xì)胞的細(xì)胞毒性达布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與未經(jīng)改造的NK-92細(xì)胞相比逾冬，經(jīng)過(guò)CRISPR編輯的CAR-NK-92細(xì)胞在體外實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出更強(qiáng)的靶向細(xì)胞毒性黍聂，尤其在AML細(xì)胞系中。盡管在B-ALL細(xì)胞系中細(xì)胞毒性效果不明顯身腻，但在AML治療中产还，三重敲除的CD276-CAR-NK-92細(xì)胞顯示出顯著增強(qiáng)的細(xì)胞毒性，表明這些經(jīng)過(guò)基因編輯的NK-92細(xì)胞有潛力成為一種有效的治療方法嘀趟。該項(xiàng)研究強(qiáng)調(diào)了NK92細(xì)胞在癌癥免疫治療中的應(yīng)用潛力脐区，特別是通過(guò)CRISPR-Cas9編輯敲除特定基因后，能夠增強(qiáng)其抗白血病的細(xì)胞毒性她按，為開發(fā)新型白血病治療方案提供了科學(xué)依據(jù)牛隅。

圖2 CBLB、NKG2A和TIGIT的gRNAs在其對(duì)應(yīng)基因中的切割位點(diǎn)[4]

增強(qiáng)NK細(xì)胞的激活途徑

I型干擾素（IFN-I）在實(shí)體腫瘤的免疫監(jiān)視中起著推動(dòng)作用酌泰。然而媒佣，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中，IFN-I驅(qū)動(dòng)的免疫反應(yīng)卻被抑制陵刹。為了探明這一機(jī)制對(duì)疾病發(fā)展的影響默伍，Kumar Anil等人[5]對(duì)此進(jìn)行研究并探索了分泌IL-15的NK細(xì)胞的治療潛力。研究者發(fā)現(xiàn)衰琐，IFN-I信號(hào)通路的高表達(dá)與B-ALL患者的有利臨床結(jié)果相關(guān)聯(lián)也糊，而IFN-I的產(chǎn)生在B-ALL微環(huán)境中受到內(nèi)在抑制，這導(dǎo)致了IL-15的減少和NK細(xì)胞功能的降低羡宙。通過(guò)采用CRISPRa技術(shù)狸剃，研究者構(gòu)建了能夠分泌IL-15的NK-92細(xì)胞，結(jié)果顯示針對(duì)MYC基因過(guò)表達(dá)的B-ALL細(xì)胞時(shí)辛辨，可以表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力和細(xì)胞毒性捕捂。在體內(nèi)模型中瑟枫，IL-15分泌型NK-92細(xì)胞能有效減緩MYC過(guò)表達(dá)B-ALL的疾病進(jìn)展斗搞，表明它們?cè)诨謴?fù)IFN-I通路活性和增強(qiáng)NK細(xì)胞介導(dǎo)的免疫監(jiān)視方面具有潛在的治療應(yīng)用指攒。

圖3 IL-15分泌的NK-92細(xì)胞能有效減緩MYC過(guò)表達(dá)的B-ALL發(fā)展[5]

CISH治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)

當(dāng)前的免疫治療策略主要針對(duì)CD8+T細(xì)胞，但許多患者對(duì)這些治療不敏感僻焚。因此允悦，研究者開始探索其他免疫細(xì)胞的潛在治療作用。在T細(xì)胞中虑啤，CISH基因的抑制已被證明可以增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)隙弛。因此研究者認(rèn)為通過(guò)敲除CISH基因，可以提高NK細(xì)胞的自然細(xì)胞毒性受體（NCR）信號(hào)傳導(dǎo)功能狞山，從而增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力全闷。Bernard?Pierre-Louis等人[6]構(gòu)建一個(gè)條件性CISH缺陷的小鼠模型（Cishfl/flNcr1Ki/+），以評(píng)估CISH在NK細(xì)胞功能和抗腫瘤特性中的作用萍启。他們使用CRISPRi技術(shù)對(duì)NK-92細(xì)胞系中的CISH基因進(jìn)行靶向敲除总珠，以探究CISH對(duì)NK細(xì)胞功能的影響。研究結(jié)果表明勘纯，敲除CISH可以增強(qiáng)NK-92細(xì)胞的NCR信號(hào)傳導(dǎo)局服，提高其抗腫瘤功能，并且減少TIGIT的表達(dá)驳遵，這可能有助于減少NK細(xì)胞的耗竭淫奔。這些發(fā)現(xiàn)表明，CISH是一個(gè)新興的治療靶點(diǎn)堤结，可以用于增強(qiáng)NK細(xì)胞免疫療法的效果唆迁。

圖4 CISH缺失的NK細(xì)胞對(duì)抗“轉(zhuǎn)移”的免疫力具有增強(qiáng)作用[6]

從以上研究不難看出，通過(guò)基因編輯改造后的NK細(xì)胞具有強(qiáng)大的“威力”對(duì)抗腫瘤竞穷。但是NK細(xì)胞對(duì)普通轉(zhuǎn)染具有抵抗力唐责，使Cas9系統(tǒng)的遞送變得困難，這是基因編輯NK細(xì)胞免疫治療的關(guān)鍵問(wèn)題来庭。

參考文獻(xiàn)：

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Nature：Natural killer cell therapies

[if !supportLists][2]?[endif]Vivier, Eric, et al. "Natural killer cell therapies."Nature626.8000 (2024): 727-736.

[if !supportLists][3]?[endif]Afolabi, Lukman O., et al. "Genetic reprogramming for NK cell cancer immunotherapy with CRISPR/Cas9." Immunology?158.2 (2019): 63-69.

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[if !supportLists][5]?[endif]Kumar, Anil, et al. "Intrinsic suppression of type I interferon production underlies the therapeutic efficacy of il-15-producing natural killer cells in B-cell acute lymphoblastic leukemia."?Journal for Immunotherapy of Cancer?11.5 (2023).

[if !supportLists][6]?[endif]Bernard, Pierre-Louis, et al. "Targeting CISH enhances natural cytotoxicity receptor signaling and reduces NK cell exhaustion to improve solid tumor immunity."?Journal for Immunotherapy of Cancer?10.5 (2022).