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  • @凍春卷 好的,謝謝師姐磺浙!

    CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測

    前期文章: 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹:解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...

  • 春卷師姐洪囤,我看到很多文章會做gRNA的陰性對照,請問您知道如何設計陰性對照比較合理嗎撕氧?

    CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測

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  • @凍春卷 春卷老師瘤缩,我的桑格測序是沒問題的,是套峰伦泥,一條鏈缺失1個密碼子剥啤,另一條鏈缺失3個密碼子,蛋白WB顯示敲除沒有問題不脯,但其他敲除細胞系敲除的是不同的外顯子铐殃,也是單克隆,但是我用前面那株單克隆做了一個RNA-seq跨新,發(fā)現(xiàn)疾病相關基因敲減了,但其他敲除細胞系就沒有這個表型坏逢。 我想問的是敲除細胞系是需要很多株進行實驗的嗎域帐?會出現(xiàn)特異性結果嗎?是整?這樣的細胞系是沒有意義的嗎肖揣?

    CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測

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  • 春卷老師,我想請問一下為什么要做核型分析浮入?龙优?我目前得到了敲除的細胞系,但是敲得不是很干凈事秀,我的抗體是一個多抗彤断,沒有好用的單抗野舶,跟抗體有關嘛? 還有我發(fā)現(xiàn)不同敲除細胞系表型不一致是什么導致的呢宰衙?辛苦您回答一下我的疑問平道,多謝!

    CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測

    前期文章: 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹:解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...

  • 2021-11-08

    標題格式: 注:# 和「一級標題」之間建議保留一個字符的空格供炼,這是最標準的 Markdown 寫法一屋。 一級標題 二級標題 三級標題 四級標題 五級標題 六級標題 順序文本 文...

  • 2021-11-08

    你來了,秋 秋祭 最愛的是秋天袋哼,是金黃色銀杏葉點綴的秋天冀墨。所有事物都很溫柔,柔柔的微風拂過涛贯,暖暖的陽光照耀诽嘉,永遠那么令人心生暖意。但是滿地落葉祭奠著秋日疫蔓,有金黃的銀杏葉含懊,紅彤...

  • @凍春卷 多謝多謝多謝多謝

    CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

    前言: 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后,就要開始驗證敲除衅胀,除了蛋白表達水平的檢測岔乔,最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同滚躯,由于之前選用的是CRISPR-Ca...

  • @凍春卷 可以告知貨號嘛雏门,謝謝啦

    CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

    前言: 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后,就要開始驗證敲除掸掏,除了蛋白表達水平的檢測茁影,最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同丧凤,由于之前選用的是CRISPR-Ca...

  • @凍春卷 非常感謝你能幫助我募闲,我手動匹配兩條序列,都匹配不上我的目的基因序列愿待,準備連接T載體嘗試了浩螺。我想請問你知道有什么試劑盒可以提取24孔或者更少細胞量的基因組提取試劑盒嗎?

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應仍侥,并且每個sgRNA的效率都不一樣的要出,因此在做正式實驗之前,我們要驗證sgRNA的效率农渊,之后優(yōu)中選優(yōu)患蹂。還是那句話,同樣的目的...

  • @科研搬磚小白菜請問你用的是什么提取基因組試劑盒啊传于?囱挑?

    CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除

    前言: 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后,就要開始驗證敲除格了,除了蛋白表達水平的檢測看铆,最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同盛末,由于之前選用的是CRISPR-Ca...

  • 120
    2021-02-28 流式入門學習

    學習視頻參考B站up主:Johnson_Han 流式細胞術原理 流式原理 BD LSRFortessa → 流式結果圖 模型 流式細胞儀的結構與抗原量化過程 鞘液和樣本在fl...

  • @凍春卷 我的是套峰,而且大部分是套三嚎京,只有一株是套二嗡贺,請問為什么會出現(xiàn)套三呢?DNA不是兩條鏈嗎鞍帝?

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應诫睬,并且每個sgRNA的效率都不一樣的,因此在做正式實驗之前帕涌,我們要驗證sgRNA的效率摄凡,之后優(yōu)中選優(yōu)。還是那句話蚓曼,同樣的目的...

  • 非常感謝你的回復亲澡,我分過一次,但是單克隆還是多峰纫版,最近得到的一個細胞株顯示是雙峰床绪,我怎么判定他是不是多倍體呢??? 這個雙峰的細胞其弊,WB顯示還是有一條很淺的帶

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應会涎,并且每個sgRNA的效率都不一樣的,因此在做正式實驗之前瑞凑,我們要驗證sgRNA的效率,之后優(yōu)中選優(yōu)概页。還是那句話籽御,同樣的目的...

  • 因為無法做facs分選單克隆,我的有限稀釋密度相對較大,因為之前分選陽性之后技掏,按1/孔铃将,分過,一塊板才1-2個單克隆哑梳,所以按10/孔分的

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應劲阎,并且每個sgRNA的效率都不一樣的,因此在做正式實驗之前鸠真,我們要驗證sgRNA的效率悯仙,之后優(yōu)中選優(yōu)。還是那句話吠卷,同樣的目的...

  • 春卷老師锡垄,其實我做的挺崩潰的。
    首先我設計了6條sgRNA,因為我同時也在做knock in祭隔。挑選的單克隆提基因組測出來的PAM后的切割都是3峰货岭,,要不就是不切割疾渴,我也重新再次分過單克隆千贯,測出來的結果還是3峰,我找不到原因搞坝,但老板說等他們擴大搔谴,直接做WB驗證。我驗證之后這6條切割過的都顯示KO細胞株有一條很淺的帶瞄沙。 最近我測到一株細胞PAM后是雙峰的己沛,這代表我之前所有的都不是單克隆嘛,可是我肉眼可見都是單克隆長起來的距境,我編輯的是小鼠成肌細胞C2C12申尼。

    我連過一次T載體,但是挑出來的結果有很多突變垫桂,與我提基因組測序又不同师幕。所以就沒有深究了,當時我用的是taq聚合酶诬滩。

    我覺得自己做的意外太多了霹粥,而且發(fā)現(xiàn)根本不適合做實驗,很多問題都沒有考慮到疼鸟,沒有人指導實驗后控,真的太悲哀了??

    老板讓我往下做功能實驗了,但是我都沒有得到好的結果??

    對于那條很淺的帶空镜,首先我只有一個isoform浩淘,然后6條sgRNA針對啦不同的外顯子捌朴,WB都顯示有很淺的帶,不完全敲除的情況张抄,比對結果砂蔽,我并沒有看到我的wt序列啊。 這樣的話署惯,只能說我的不是單克隆左驾,我是自己有限稀釋的,平均10/孔极谊」钣遥看起來真的都是單克隆啊。怀酷。如果真的不是單克隆的話稻爬,我好像又要從頭來過了??
    對不起,給你打這么多字蜕依,因為沒有師兄師姐桅锄,導師也不會指導如何做實驗,這一年真的太艱難啦????

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應样眠,并且每個sgRNA的效率都不一樣的友瘤,因此在做正式實驗之前,我們要驗證sgRNA的效率檐束,之后優(yōu)中選優(yōu)辫秧。還是那句話,同樣的目的...

  • 謝謝啦!發(fā)現(xiàn)自己做實驗太不嚴謹了??

    CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應被丧,并且每個sgRNA的效率都不一樣的盟戏,因此在做正式實驗之前,我們要驗證sgRNA的效率甥桂,之后優(yōu)中選優(yōu)柿究。還是那句話,同樣的目的...

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