生信分析媛礁蔗，每天解決一個小問題觉义，邊記錄邊成長。精耕細作浴井，細節(jié)見實力晒骇。
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@凍春卷 好的，謝謝師姐磺浙！
CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測
前期文章： 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹：解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...
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春卷師姐洪囤，我看到很多文章會做gRNA的陰性對照，請問您知道如何設計陰性對照比較合理嗎撕氧？
CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測
前期文章： 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹：解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...
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@凍春卷 春卷老師瘤缩，我的桑格測序是沒問題的，是套峰伦泥，一條鏈缺失1個密碼子剥啤，另一條鏈缺失3個密碼子，蛋白WB顯示敲除沒有問題不脯，但其他敲除細胞系敲除的是不同的外顯子铐殃，也是單克隆，但是我用前面那株單克隆做了一個RNA-seq跨新，發(fā)現(xiàn)疾病相關基因敲減了，但其他敲除細胞系就沒有這個表型坏逢。 我想問的是敲除細胞系是需要很多株進行實驗的嗎域帐？會出現(xiàn)特異性結果嗎？是整？這樣的細胞系是沒有意義的嗎肖揣？
CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測
前期文章： 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹：解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...
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春卷老師，我想請問一下為什么要做核型分析浮入？龙优？我目前得到了敲除的細胞系，但是敲得不是很干凈事秀，我的抗體是一個多抗彤断，沒有好用的單抗野舶，跟抗體有關嘛？ 還有我發(fā)現(xiàn)不同敲除細胞系表型不一致是什么導致的呢宰衙？辛苦您回答一下我的疑問平道，多謝！
CRISPR-Cas9基因編輯--脫靶效應如何檢測
前期文章： 我們用兩篇文章的篇幅大概講了一遍質粒骨架及其各個要素的介紹：解剖式學習一個質粒結構--update[http://www.reibang.com/p/e6c58...
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2021-11-08
標題格式： 注：# 和「一級標題」之間建議保留一個字符的空格供炼，這是最標準的 Markdown 寫法一屋。 一級標題 二級標題 三級標題 四級標題 五級標題 六級標題 順序文本 文...
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2021-11-08
你來了，秋 秋祭 最愛的是秋天袋哼，是金黃色銀杏葉點綴的秋天冀墨。所有事物都很溫柔，柔柔的微風拂過涛贯，暖暖的陽光照耀诽嘉，永遠那么令人心生暖意。但是滿地落葉祭奠著秋日疫蔓，有金黃的銀杏葉含懊，紅彤...
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@凍春卷 多謝多謝多謝多謝
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除
前言： 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除衅胀，除了蛋白表達水平的檢測岔乔，最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同滚躯，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@凍春卷 可以告知貨號嘛雏门，謝謝啦
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除
前言： 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除掸掏，除了蛋白表達水平的檢測茁影，最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同丧凤，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@凍春卷 非常感謝你能幫助我募闲，我手動匹配兩條序列，都匹配不上我的目的基因序列愿待，準備連接T載體嘗試了浩螺。我想請問你知道有什么試劑盒可以提取24孔或者更少細胞量的基因組提取試劑盒嗎？
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應仍侥，并且每個sgRNA的效率都不一樣的要出，因此在做正式實驗之前，我們要驗證sgRNA的效率农渊，之后優(yōu)中選優(yōu)患蹂。還是那句話，同樣的目的...
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@科研搬磚小白菜請問你用的是什么提取基因組試劑盒啊传于？囱挑？
CRISPR-Cas9基因編輯7--測序驗證敲除
前言： 使用挑單克隆技術得到多個單克隆細胞系后，就要開始驗證敲除格了，除了蛋白表達水平的檢測看铆，最終還是要看測序結果。關于測序的方案也是各有不同盛末，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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2021-02-28 流式入門學習學習視頻參考B站up主：Johnson_Han 流式細胞術原理 流式原理 BD LSRFortessa → 流式結果圖 模型 流式細胞儀的結構與抗原量化過程 鞘液和樣本在fl...
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可教學（轉錄組測序、單細胞測序
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@凍春卷 我的是套峰，而且大部分是套三嚎京，只有一株是套二嗡贺，請問為什么會出現(xiàn)套三呢？DNA不是兩條鏈嗎鞍帝？
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應诫睬，并且每個sgRNA的效率都不一樣的，因此在做正式實驗之前帕涌，我們要驗證sgRNA的效率摄凡，之后優(yōu)中選優(yōu)。還是那句話蚓曼，同樣的目的...
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非常感謝你的回復亲澡，我分過一次，但是單克隆還是多峰纫版，最近得到的一個細胞株顯示是雙峰床绪，我怎么判定他是不是多倍體呢？?? 這個雙峰的細胞其弊，WB顯示還是有一條很淺的帶
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應会涎，并且每個sgRNA的效率都不一樣的，因此在做正式實驗之前瑞凑，我們要驗證sgRNA的效率，之后優(yōu)中選優(yōu)概页。還是那句話籽御，同樣的目的...
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因為無法做facs分選單克隆，我的有限稀釋密度相對較大，因為之前分選陽性之后技掏，按1/孔铃将，分過，一塊板才1-2個單克隆哑梳，所以按10/孔分的
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應劲阎，并且每個sgRNA的效率都不一樣的，因此在做正式實驗之前鸠真，我們要驗證sgRNA的效率悯仙，之后優(yōu)中選優(yōu)。還是那句話吠卷，同樣的目的...
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春卷老師锡垄，其實我做的挺崩潰的。
首先我設計了6條sgRNA,因為我同時也在做knock in祭隔。挑選的單克隆提基因組測出來的PAM后的切割都是3峰货岭，，要不就是不切割疾渴，我也重新再次分過單克隆千贯，測出來的結果還是3峰，我找不到原因搞坝，但老板說等他們擴大搔谴，直接做WB驗證。我驗證之后這6條切割過的都顯示KO細胞株有一條很淺的帶瞄沙。 最近我測到一株細胞PAM后是雙峰的己沛，這代表我之前所有的都不是單克隆嘛，可是我肉眼可見都是單克隆長起來的距境，我編輯的是小鼠成肌細胞C2C12申尼。
我連過一次T載體，但是挑出來的結果有很多突變垫桂，與我提基因組測序又不同师幕。所以就沒有深究了，當時我用的是taq聚合酶诬滩。
我覺得自己做的意外太多了霹粥，而且發(fā)現(xiàn)根本不適合做實驗，很多問題都沒有考慮到疼鸟，沒有人指導實驗后控，真的太悲哀了??
老板讓我往下做功能實驗了，但是我都沒有得到好的結果??
對于那條很淺的帶空镜，首先我只有一個isoform浩淘，然后6條sgRNA針對啦不同的外顯子捌朴，WB都顯示有很淺的帶，不完全敲除的情況张抄，比對結果砂蔽，我并沒有看到我的wt序列啊。 這樣的話署惯，只能說我的不是單克隆左驾，我是自己有限稀釋的，平均10/孔极谊」钣遥看起來真的都是單克隆啊。怀酷。如果真的不是單克隆的話稻爬，我好像又要從頭來過了??
對不起，給你打這么多字蜕依，因為沒有師兄師姐桅锄，導師也不會指導如何做實驗，這一年真的太艱難啦????CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應样眠，并且每個sgRNA的效率都不一樣的友瘤，因此在做正式實驗之前，我們要驗證sgRNA的效率檐束，之后優(yōu)中選優(yōu)辫秧。還是那句話，同樣的目的...
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謝謝啦!發(fā)現(xiàn)自己做實驗太不嚴謹了??
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應被丧，并且每個sgRNA的效率都不一樣的盟戏，因此在做正式實驗之前，我們要驗證sgRNA的效率甥桂，之后優(yōu)中選優(yōu)柿究。還是那句話，同樣的目的...
