昨天元宵符欠，就算是把年過(guò)完了嫡霞，我們又要開(kāi)始一年的奔波了，有的時(shí)候我真的想問(wèn)一句希柿，去年過(guò)的并不算很好诊沪，能不能退我一歲？??曾撤，莫泊桑曾說(shuō)過(guò)端姚，生活不可能像你想得那么好，但也不會(huì)像你想的那么遭~~~挤悉，這一篇分享的文獻(xiàn)在Subclonal evolution and expansion of spatially distinct THY1-positive cells is associated with recurrence in glioblastoma渐裸，我們來(lái)看看膠質(zhì)母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)的空間克隆研究。

圖片.png

文章思路

研究目的

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）是一種以不可避免的復(fù)發(fā)為特征的致命疾病尖啡。 在這里橄仆，研究了介導(dǎo)耐藥性的分子途徑，目的是確定針對(duì)這種腫瘤的治療機(jī)會(huì)衅斩。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

開(kāi)發(fā)了一種縱向體內(nèi)復(fù)發(fā)模型盆顾，利用患者衍生的外植體在替莫唑胺 (TMZ) 和放射 (IR) 后產(chǎn)生配對(duì)標(biāo)本（復(fù)發(fā)前和復(fù)發(fā)后）。 評(píng)估這些樣本的治療反應(yīng)并確定驅(qū)動(dòng)治療抗性的基因表達(dá)途徑畏梆。 使用 GBM 的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行了臨床驗(yàn)證（空間轉(zhuǎn)錄組已經(jīng)開(kāi)始做臨床驗(yàn)證了）您宪。

研究成果

These studies reveal in replicate cohorts, a gene expression profile characterized by upregulation of mesenchymal and stem-like genes at recurrence奈懒。對(duì)臨床數(shù)據(jù)庫(kù)的分析顯示，這種轉(zhuǎn)錄譜的表達(dá)增加與中位總生存期較差（248 天 vs 430 天宪巨，p=0.0004）顯著相關(guān)磷杏，并且復(fù)發(fā)時(shí)該譜的上調(diào)。最值得注意的是捏卓，發(fā)現(xiàn)了 TGFβ 信號(hào)的上調(diào)极祸，以及復(fù)發(fā)時(shí) THY1 水平增加了一百多倍。利用細(xì)胞分選怠晴，觀察到 THY1 陽(yáng)性細(xì)胞在初治腫瘤中占不到 10% 的細(xì)胞遥金，在復(fù)發(fā)性腫瘤中占 75-96%。然后蒜田，從未接受過(guò)治療的患者樣本中分離出 THY1 陽(yáng)性細(xì)胞稿械，并確定它們?cè)谠荒Ｐ椭袑?duì)放化療具有固有的抵抗力。此外冲粤，使用來(lái)自未經(jīng)治療的 GBM 的圖像引導(dǎo)活檢美莫，進(jìn)行了空間轉(zhuǎn)錄組分析。空間轉(zhuǎn)錄組揭示了以間充質(zhì)/干細(xì)胞樣基因表達(dá)為特征的罕見(jiàn) THY1+ 區(qū)域梯捕，類似于復(fù)發(fā)性小鼠模型樣本厢呵，其與血管周圍生態(tài)位內(nèi)的巨噬細(xì)胞共定位。由于 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)有助于間充質(zhì)/干細(xì)胞樣表型科阎，在體內(nèi)抑制 TGFβ RI 活性述吸，導(dǎo)致間充質(zhì)/干細(xì)胞樣蛋白水平降低忿族，包括 THY1锣笨，并恢復(fù)復(fù)發(fā)性腫瘤對(duì) TMZ/IR 的敏感性。

結(jié)論

這些發(fā)現(xiàn)表明道批，GBM 復(fù)發(fā)可能是由于血管周圍生態(tài)位內(nèi)預(yù)先存在的错英、治療抗性的、THY1 陽(yáng)性隆豹、間充質(zhì)/干細(xì)胞樣細(xì)胞的腫瘤再增殖引起的椭岩。 此外，數(shù)據(jù)證明了靶向抗性亞克隆中上調(diào)途徑作為實(shí)現(xiàn)治療反應(yīng)的新機(jī)制的前景璃赡，特別是 THY1 表達(dá)可能代表對(duì) TGFβ 抑制反應(yīng)的生物標(biāo)志物判哥。

詳細(xì)看看全文，這一篇主要是運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行臨床驗(yàn)證碉考，非常棒塌计，如果空間轉(zhuǎn)錄組走向臨床，前景非常廣闊

INTRODUCTION

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 (GBM) 是最常見(jiàn)的原發(fā)性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)腫瘤侯谁，是一種中位生存期為 15 個(gè)月的致命疾病锌仅，其特點(diǎn)是治療抵抗章钾、侵襲性腦部侵襲和不可避免的復(fù)發(fā)，不到 10% 的患者存活超過(guò) 5 年.導(dǎo)致快速?gòu)?fù)發(fā)和缺乏有效治療的主要障礙是 GBM 明顯的腫瘤內(nèi)和腫瘤間異質(zhì)性热芹。此外贱傀，鑒于 GBM 中存在的異質(zhì)性，人們假設(shè)先前存在的抗治療亞克隆的進(jìn)化和擴(kuò)展通常是不可避免的復(fù)發(fā)的原因伊脓。在細(xì)胞和微環(huán)境水平上都可以看到瘤內(nèi)異質(zhì)性府寒。在腫瘤微環(huán)境水平上，不同的生態(tài)位报腔，尤其是血管周圍椰棘、缺氧和侵襲性腫瘤生態(tài)位，已被證明富含抗治療癌癥干細(xì)胞 (CSC) 群榄笙，也被描述為復(fù)發(fā)啟動(dòng)干細(xì)胞邪狞。這些預(yù)先存在的 CSC 群體被認(rèn)為在驅(qū)動(dòng)治療耐藥性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其特點(diǎn)是自我更新茅撞、分化以及治療后擴(kuò)大和重新填充腫瘤的能力帆卓。缺乏關(guān)于預(yù)先存在的抗治療癌癥干細(xì)胞在逃避化學(xué)放射治療中的作用以及這種表型的機(jī)制基礎(chǔ)的確切證據(jù)。了解治療耐藥表型的遺傳基礎(chǔ)應(yīng)該為治療干預(yù)提供機(jī)會(huì)米丘，以降低 GBM 的復(fù)發(fā)率剑令。

在這項(xiàng)工作中，利用了使用源自患者的 GBM 外植體開(kāi)發(fā)的縱向小鼠模型來(lái)概括臨床治療范例拄查。使用該模型吁津，從每只實(shí)驗(yàn)小鼠中生成了預(yù)處理和復(fù)發(fā)配對(duì)樣本，目的是識(shí)別差異表達(dá)的基因堕扶，這些基因應(yīng)該為腫瘤復(fù)發(fā)提供分子基礎(chǔ)碍脏。對(duì)多個(gè)重復(fù)顱內(nèi)患者衍生異種移植物 (PDX) 的系統(tǒng)分析顯示，復(fù)發(fā)性腫瘤的特征在于具有間充質(zhì)和 CSC 特征的基因表達(dá)模式特征稍算，其中包括 THY1/CD90典尾、TGFβ1、TGFβ2糊探、SOX2钾埂、ZEB2 和 GLI2 的上調(diào).與之前的觀察結(jié)果一致，使用大型 GBM 隊(duì)列證明該基因表達(dá)譜與較差的總體預(yù)后相關(guān)科平，突出了研究結(jié)果的臨床意義褥紫。為了檢驗(yàn)?zāi)[瘤復(fù)發(fā)可能歸因于以該基因表達(dá)特征為特征的預(yù)先存在的細(xì)胞群的假設(shè)，對(duì)來(lái)自未接受治療的患者樣本的 THY1+ 細(xì)胞進(jìn)行免疫分選瞪慧，并證明顱內(nèi)腫瘤來(lái)源于 THY1+ 細(xì)胞（Pre-THY1+）與未分類的腫瘤相比髓考，它們具有固有的治療抗性。這些結(jié)果表明汞贸，在最初的初治腫瘤中可以發(fā)現(xiàn)具有不同基因表達(dá)譜的罕見(jiàn)的固有治療抗性細(xì)胞群绳军，并導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)印机。作為支持，用逆轉(zhuǎn)間充質(zhì)基因表達(dá)特征的靶向藥物治療腫瘤门驾，導(dǎo)致對(duì)放化療的敏感性恢復(fù)射赛。此外，human GBM 標(biāo)本的空間轉(zhuǎn)錄組分析一致地確定了 THY1+ 細(xì)胞與間充質(zhì)奶是、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞和巨噬細(xì)胞基因特征的表達(dá)共定位楣责，并且主要在血管周圍的生態(tài)位中發(fā)現(xiàn)。這表明這些罕見(jiàn)的耐藥細(xì)胞在血管腫瘤微環(huán)境中的重要作用聂沙。

Spatial transcriptomics的分析

獲得的人體樣本立即在液氮/異戊烷中冷凍秆麸，然后將它們嵌入最佳切割溫度的化合物中并冷凍。將組織切片到 Visium Spatial Gene Expression Slide (10X Genomics) 上并透化以釋放 mRNA 以與空間條形碼捕獲探針結(jié)合及汉。這用于合成 cDNA沮趣，然后制備測(cè)序文庫(kù)和測(cè)序。使用 Vslide (v1.1.115, MetaSystems GmbH) 對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化并將生成的圖像放在一起坷随。使用 10X genomics軟件（Space Ranger 和 Loupe Browser）對(duì)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行成像和分析房铭。使用 Load10x_Spatial 函數(shù)將 SpaceRanger 輸出文件導(dǎo)入 R。使用 SCTransform 函數(shù)對(duì)這些點(diǎn)進(jìn)行庫(kù)大小標(biāo)準(zhǔn)化温眉，控制在每個(gè)點(diǎn)表達(dá)的線粒體基因的百分比缸匪。在使用 PCA 和 UMAP 進(jìn)行降維之前，使用 MAGIC 估算基因計(jì)數(shù)以平滑數(shù)據(jù)类溢。具體來(lái)說(shuō)凌蔬，主成分是使用插補(bǔ)后的top變量基因計(jì)算的，前 30 個(gè)主成分的數(shù)據(jù)嵌入用于識(shí)別集群和學(xué)習(xí) UMAP 嵌入闯冷。通過(guò)從 MSigDb 以及其他數(shù)據(jù)集中整理感興趣的特定基因集砂心，準(zhǔn)備了基因集集合對(duì)象。富集分?jǐn)?shù)是根據(jù) MAGIC 估算的計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)計(jì)算的窃躲〖品。基于平均表達(dá)將所有基因分組到30個(gè)bin中钦睡。在每個(gè)給定的基因組中蒂窒，每個(gè)基因的平均表達(dá)與來(lái)自相應(yīng)bin的一百個(gè)其他隨機(jī)采樣基因作為靶基因一起計(jì)算。在每個(gè)點(diǎn)計(jì)算感興趣的靶基因與對(duì)照基因的平均表達(dá)差異荞怒，以計(jì)算富集分?jǐn)?shù)洒琢。在計(jì)算每個(gè)點(diǎn)的基因集的富集分?jǐn)?shù)后，生成了通路分?jǐn)?shù)與 THY1 表達(dá)的散點(diǎn)圖褐桌，并計(jì)算了控制 G1.S 細(xì)胞周期分?jǐn)?shù)的兩者之間的 Spearman 偏相關(guān)性衰抑，以解釋細(xì)胞的變化整個(gè)組織切片的活力。為了確定 THY1 表達(dá)和通路活性之間的空間重疊荧嵌，對(duì)每個(gè)點(diǎn)進(jìn)行了區(qū)域 Fisher 精確檢驗(yàn)呛踊±剩基于 THY1 表達(dá)和通路評(píng)分，將數(shù)據(jù)二值化為第 75 個(gè)分位數(shù)的 THY1 陽(yáng)性和通路陽(yáng)性谭网。然后汪厨，檢查了每個(gè)點(diǎn)的 k=25 最近鄰，并進(jìn)行了 Fisher 精確檢驗(yàn)以確定這兩個(gè)特征是否存在顯著重疊愉择，即劫乱，pathway scores是否恰好在 THY1 陽(yáng)性區(qū)域特別豐富。然后將 Fisher 檢驗(yàn) p 值疊加到組織切片上的每個(gè)spot上锥涕，以可視化在兩個(gè)特征中具有顯著重疊的區(qū)域衷戈。

RESULTS

in vivo modeling recapitulates therapeutic response to TMZ/IR followed by recurrence

為了評(píng)估 GBM 中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療 (TMZ/IR) 的治療反應(yīng)和潛在遺傳基礎(chǔ)，在顱內(nèi)異種移植物中使用了患者來(lái)源的外植體层坠。每周進(jìn)行磁共振成像以監(jiān)測(cè)植入后的腫瘤生長(zhǎng)情況殖妇。攜帶約 20mm³ 腫瘤的小鼠被隨機(jī)分為三個(gè)研究組。第一個(gè)代表未經(jīng)治療的對(duì)照動(dòng)物破花，第二個(gè)隊(duì)列同時(shí)用 TMZ/IR 治療兩周拉一。第三組同時(shí)給予 TMZ/IR 2 周，然后每周 3 次輔助 TMZ旧乞，在完成第二周 TMZ/IR 后每隔一周蔚润。該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)旨在研究對(duì)標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理療法的抵抗機(jī)制。與腫瘤體積增加超過(guò) 300% 并在第三周死于疾病的對(duì)照動(dòng)物相比尺栖，TMZ/IR 治療的動(dòng)物表現(xiàn)出最初的腫瘤消退并存活超過(guò)六周嫡纠。接受 TMZ 佐劑的小鼠表現(xiàn)出更大的腫瘤生長(zhǎng)延遲，并且存活時(shí)間延長(zhǎng)（>12 周）延赌。盡管對(duì)治療有初步反應(yīng)除盏，但所有接受治療的動(dòng)物都有復(fù)發(fā).

為了更好地了解治療耐藥性發(fā)展的潛在遺傳基礎(chǔ)，在開(kāi)始治療之前挫以，使用 MRI 引導(dǎo)的立體定向顱內(nèi)活檢從動(dòng)物身上獲取腫瘤組織者蠕。 這種活檢程序不會(huì)顯著影響大體腫瘤結(jié)構(gòu)。 在復(fù)發(fā)時(shí)也從這些動(dòng)物獲得活的腫瘤組織掐松。 收集配對(duì)的預(yù)處理和復(fù)發(fā)腫瘤樣本用于進(jìn)一步分析踱侣。

Recurrent tumors are distinctly resistant to TMZ/IR

為了評(píng)估復(fù)發(fā)性腫瘤對(duì)治療的敏感性，將來(lái)自治療前和復(fù)發(fā)性活檢的配對(duì)神經(jīng)球培養(yǎng)物經(jīng)顱內(nèi)和皮下植入免疫缺陷小鼠大磺。將具有可觸及腫瘤的皮下植入小鼠模型隨機(jī)分為對(duì)照組或用 TMZ/IR 治療兩周抡句，然后如上所述輔助 TMZ。在沒(méi)有治療的情況下杠愧，通過(guò)活檢獲得的治療前和復(fù)發(fā)性腫瘤都以相似的速度生長(zhǎng)待榔。作為對(duì) TMZ/IR 的響應(yīng)，治療前的腫瘤表現(xiàn)出顯著的腫瘤生長(zhǎng)延遲（類似于最初的患者來(lái)源的腫瘤）流济，并且腫瘤體積減少了 50%锐锣。然而腌闯，來(lái)自復(fù)發(fā)性活檢的腫瘤繼續(xù)表現(xiàn)出對(duì) TMZ/IR 的耐藥性，并且腫瘤體積增加了 750%雕憔。為了在適當(dāng)?shù)哪[瘤微環(huán)境中確認(rèn)這些發(fā)現(xiàn)绑嘹，使用相同的配對(duì)神經(jīng)球建立顱內(nèi)腫瘤。與來(lái)自治療前樣本的小鼠相比橘茉，用 TMZ/IR 加輔助 TMZ 治療患有顱內(nèi)復(fù)發(fā)性腫瘤的小鼠證明了它們對(duì)治療的抵抗力工腋。作為支持，攜帶復(fù)發(fā)性腫瘤的小鼠的中位生存期為 7 周畅卓，而未經(jīng)治療的腫瘤為 11.9 周（p=0.006）

圖片.png

圖片.png

Recurrent tumors develop a therapeutic resistant phenotype with increased mesenchymal and stem cell gene expression patterns and THY1 upregulation（復(fù)發(fā)性腫瘤發(fā)展為具有增加的間充質(zhì)和干細(xì)胞基因表達(dá)模式以及 THY1 上調(diào)的治療抗性表型 ）

為了描述在復(fù)發(fā)樣本中觀察到的治療抗性的潛在基因組基礎(chǔ)擅腰，使用 RNAseq 對(duì)來(lái)自同一主題動(dòng)物的治療前和復(fù)發(fā)活檢的至少三個(gè)獨(dú)立重復(fù)進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析。 發(fā)現(xiàn)1159個(gè)基因存在差異表達(dá)（FDR<0.05）翁潘。 在這些差異表達(dá)基因中趁冈，645 個(gè)基因在復(fù)發(fā)性腫瘤樣本中上調(diào)，而 514 個(gè)基因下調(diào)拜马。 無(wú)監(jiān)督聚類分析顯示在多個(gè)重復(fù)中預(yù)處理和復(fù)發(fā)腫瘤的不同轉(zhuǎn)錄組學(xué)特征渗勘。 此外，每個(gè)治療前樣本的轉(zhuǎn)錄組與原始患者衍生的神經(jīng)球培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)錄組非常相似俩莽，這表明基因表達(dá)譜在體外擴(kuò)增或顱內(nèi)植入后沒(méi)有drift significantly旺坠。

接下來(lái)，使用用于注釋扮超、可視化和集成發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)庫(kù) (DAVID) 進(jìn)行了基因GO分析取刃，以識(shí)別富含 TMZ/IR 抗性腫瘤的細(xì)胞過(guò)程。 復(fù)發(fā)性腫瘤顯示出改變的生物學(xué)過(guò)程出刷，如 20 個(gè)上調(diào)和 13 個(gè)下調(diào)的功能clusters（FDR<0.05）璧疗。 這些clusters被進(jìn)一步合并以產(chǎn)生一組非冗余的 10 個(gè)上調(diào)基因clusters和 7 個(gè)下調(diào)基因clusters。 在七個(gè)下調(diào)的clusters中馁龟，六個(gè)與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡有關(guān)崩侠。 參與細(xì)胞粘附、神經(jīng)元分化/發(fā)育和細(xì)胞形態(tài)發(fā)生的基因在上調(diào)的clusters中占主導(dǎo)地位坷檩。 特別地却音，復(fù)發(fā)性腫瘤過(guò)表達(dá)與細(xì)胞粘附相關(guān)的基因（例如 ITGB3、ITGB5淌喻、ITGB8僧家、NEDD9、FBLN7裸删、NLGN2、CADM1 和 VCAN）以及與間充質(zhì)表型相關(guān)的基因（TGFΒ2阵赠、TGFΒ1涯塔、THY1)肌稻。

發(fā)現(xiàn)該基因表達(dá)特征的上調(diào)與治療抗性表型相關(guān)，如臨床數(shù)據(jù)庫(kù)中較差的預(yù)后所示匕荸〉罚基于前 64 個(gè)細(xì)胞粘附基因的平均基因表達(dá)水平創(chuàng)建meta基因評(píng)分。從 TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇接受 TMZ 和 IR 治療的 GBM 患者榛搔，并根據(jù) metagene 評(píng)分對(duì)他們進(jìn)行排名诺凡。比較了 metagene 評(píng)分高的患者（所選患者總數(shù)的 1/3 以上）和 metagene 評(píng)分低的患者（所選患者總數(shù)的 1/3 以下）的無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期。如下圖所示践惑，具有高 metagene 評(píng)分的患者的臨床結(jié)果較差腹泌，無(wú)論是在中位無(wú)進(jìn)展生存期（260 天與 189 天相比，p=0.0003）還是中位總生存期（中位生存期為 430 天與248 天尔觉，p = 0.0004)凉袱。該分析證實(shí)了從實(shí)驗(yàn)小鼠模型中的觀察結(jié)果，即實(shí)驗(yàn)觀察到的特征的增加與患者的治療抗性相關(guān)侦铜。

圖片.png

圖片.png

為了探索與細(xì)胞粘附专甩、間充質(zhì)和干細(xì)胞表型相關(guān)的基因在 TMZ/IR 抗性中的作用，我們首先驗(yàn)證了從 RNAseq 分析中選擇的基因（ZEB2钉稍、VCAN涤躲、CDK6、THY1贡未、GLI2篓叶、SOX2），這些基因以前與治療相關(guān) GBM 中的耐藥性羞秤。 定量 PCR 分析證實(shí) ZEB2缸托、VCAN、CDK6瘾蛋、THY1俐镐、GLI2 和 SOX2 mRNA 水平在所有四個(gè)復(fù)發(fā)性腫瘤樣本中與未接受治療的對(duì)應(yīng)物相比上調(diào)。 蛋白質(zhì)印跡分析證實(shí)哺哼，與未處理的對(duì)應(yīng)物相比佩抹，大多數(shù)復(fù)發(fā)樣本中每個(gè)基因的蛋白質(zhì)水平也有所增加。 CD133 細(xì)胞表面表位（膠質(zhì)瘤干性的標(biāo)志物）的表達(dá)在四種復(fù)發(fā)性腫瘤中的三種中也顯著升高取董。

與在重復(fù)復(fù)發(fā)腫瘤之間觀察到的基因表達(dá)的這些一致變化相反棍苹，對(duì)每個(gè)預(yù)處理和復(fù)發(fā)樣本之間的拷貝數(shù)增加或拷貝數(shù)丟失的分析沒(méi)有顯示任何顯著和一致的變化。這表明耐藥性的發(fā)展表型是由基因表達(dá)變化而不是基因組變化引起的茵汰，突出了調(diào)節(jié)已確定的相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路的重要性枢里。

圖片.png

圖片.png

Inhibition of TGFβ signaling decreases THY1 expression, reverses the mesenchymal resistance phenotype, and results in improved treatment sensitivity in vivo

在復(fù)發(fā)性腫瘤中，耐藥表型的特征是間充質(zhì)和 CSC 基因的表達(dá)增加。具體而言栏豺，TGFβ途徑也顯著上調(diào)彬碱。事實(shí)上，復(fù)發(fā)性腫瘤中的許多（63 個(gè)中的 21 個(gè)）上調(diào)基因與 TGFβ 信號(hào)通路直接或間接相關(guān)奥洼。 TGFβ被認(rèn)為是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的主要調(diào)節(jié)因子巷疼。為了評(píng)估 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)與上調(diào)基因表達(dá)譜和 TMZ/IR 抗性的關(guān)聯(lián)，使用了 TGFβR1 絲氨酸蘇氨酸激酶抑制劑灵奖〗姥兀患有來(lái)自預(yù)處理 (P2) 和復(fù)發(fā)性腫瘤 (R1) 的側(cè)腹腫瘤的動(dòng)物被隨機(jī)分為四組：1) 對(duì)照組（未治療），2) TMZ/IR 治療瓷患，3) 單獨(dú)使用 TGFβ 抑制劑治療 (LY2109761) , 和 4) 用 TMZ/IR 和 LY2109761 的組合治療骡尽。未經(jīng)處理的腫瘤樣本（P2 和 R1）以及經(jīng)處理的復(fù)發(fā)性腫瘤樣本（RT1-5）的蛋白質(zhì)印跡分析顯示，與未經(jīng)處理的腫瘤相比尉尾，用 LY2109761 治療腫瘤導(dǎo)致 THY1爆阶、ZEB2、CDK6沙咏、SOX2 和 GLI2 的水平降低復(fù)發(fā)性腫瘤辨图。此外，這些間充質(zhì)/干表型標(biāo)志物在接受 TMZ/IR 和同時(shí)接受 LY2109761 的腫瘤中也下調(diào)肢藐。這些發(fā)現(xiàn)表明 LY2109761 適當(dāng)?shù)匕邢蛄薌BM 模型中預(yù)期的感興趣的途徑故河。

LY2109761 單藥治療并未顯著減緩腫瘤生長(zhǎng)。 然而吆豹，與單藥 LY2109761 或 TMZ/IR 治療相比鱼的，將 LY2109761 與 TMZ/IR 聯(lián)合使用可顯著降低腫瘤生長(zhǎng)。 這些發(fā)現(xiàn)表明 TGFβ 介導(dǎo)的間充質(zhì)和干細(xì)胞樣基因表達(dá)譜激活促進(jìn)了對(duì) TMZ/IR 的抗性痘煤，并且 TGFβ 抑制下調(diào)間充質(zhì)和干細(xì)胞樣表型恢復(fù)對(duì) TMZ/IR 的敏感性凑阶。

圖片.png

Rare THY1+ cell populations derived from treatment naive GBM are inherently TMZ/IR resistant, and repopulate the recurrent tumors

上述發(fā)現(xiàn) THY1 轉(zhuǎn)錄物和蛋白質(zhì)水平在復(fù)發(fā)腫瘤樣本中上調(diào)（與未治療樣本相比超過(guò) 100 倍），結(jié)合觀察到 LY2109761 治療導(dǎo)致 THY1 表達(dá)降低并恢復(fù)復(fù)發(fā)腫瘤對(duì)TMZ/IR衷快，促使進(jìn)一步研究 THY1宙橱。在人類癌癥中，THY1 與預(yù)后不良有關(guān)蘸拔，與癌癥干細(xì)胞有關(guān)师郑，并在粘附、侵襲调窍、轉(zhuǎn)移宝冕、免疫逃避和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。鑒于 THY1 表達(dá)與治療抗性和間充質(zhì)特征的關(guān)聯(lián)邓萨、其在復(fù)發(fā)性腫瘤樣本中的顯著上調(diào)以及其作為細(xì)胞表面標(biāo)志物的地位地梨，定量評(píng)估了 THY1+ 細(xì)胞在腫瘤中的存在菊卷。在未經(jīng)治療的腫瘤活檢中，觀察到 THY1+ 細(xì)胞占比 6-10%湿刽。相比之下的烁，復(fù)發(fā)性腫瘤中 75-96% 的細(xì)胞是 THY1+实束。 FACS 從預(yù)處理樣品 (Pre-THY1+) 中分離和擴(kuò)增 THY1+ 細(xì)胞鲫尊，證實(shí)它們保留了細(xì)胞表面 THY1 的表達(dá)菜枷。然后將 Pre-THY1+ 細(xì)胞顱內(nèi)植入裸鼠并用 TMZ/IR 處理。這些實(shí)驗(yàn)表明雅镊，Pre-THY1+ 細(xì)胞實(shí)際上在一定程度上具有與復(fù)發(fā)性腫瘤相似的固有治療抗性。此外刃滓，攜帶使用 Pre-THY1+ 細(xì)胞衍生的顱內(nèi)腫瘤的小鼠的存活率與攜帶源自復(fù)發(fā)細(xì)胞的腫瘤的小鼠相似仁烹。This finding, combined with the consistent observation that each of the recurrent tumors (R1-R4) exhibited an enrichment of THY1+ cells when compared to their respective pre-treatment biopsy (P1-P3) suggests that THY1+ cells represented a treatment recalcitrant cell population within the treatment-na?ve tumors. These cells have stem cell like features with a mesenchymal phenotype, and likely survive therapeutic intervention and repopulate the tumor.

為了評(píng)估上調(diào)的 THY1 的臨床意義及其與治療抗性的關(guān)聯(lián)，分析了來(lái)自 GLASS 聯(lián)盟和其他臨床數(shù)據(jù)庫(kù)的配對(duì)人類 GBM 標(biāo)本咧虎，這些標(biāo)本顯示 THY1 基因表達(dá)在大多數(shù)復(fù)發(fā)性腫瘤中顯著上調(diào)卓缰。 對(duì) TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)的分析表明，高 THY1 表達(dá)與顯著更差的無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期相關(guān)砰诵。 這些發(fā)現(xiàn)表明我們的模型與臨床情況相似征唬，并進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了 THY1 在 TMZ/IR 抗性發(fā)展中的作用，并表明表達(dá) THY1 的 GBM 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增可能有助于 TMZ/IR 抗性茁彭。

圖片.png

圖片.png

THY1 expression in human GBM is spatial niche-dependent

體內(nèi)研究表明 THY1 表達(dá)與治療耐藥性和干細(xì)胞和間充質(zhì)基因表達(dá)特征相關(guān)总寒，結(jié)合最近的研究表明 THY1+ 細(xì)胞通常存在于血管周圍或干細(xì)胞生態(tài)位內(nèi)，并與間充質(zhì)和干細(xì)胞基因表達(dá)相關(guān)模式理肺，促使評(píng)估 THY1 表達(dá)細(xì)胞在患者來(lái)源的 GBM 腫瘤組織中的空間分布摄闸。來(lái)自高灌注區(qū)域（即高血管分布）的圖像引導(dǎo)術(shù)中人類 GBM 活檢的空間定量全轉(zhuǎn)錄組分析（空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)）顯示 THY1 表達(dá)顯著共定位于血管周圍生態(tài)位，其特征在于共表達(dá)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞和間充質(zhì)特征妹萨，以及 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)年枕。還對(duì)源自低灌注區(qū)域的活檢進(jìn)行了空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)。該分析還表明乎完，THY1 在血管周圍生態(tài)位內(nèi)表達(dá)熏兄，并與間充質(zhì)和干細(xì)胞特征顯著共定位，TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)上調(diào)囱怕。

由于已知腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞會(huì)驅(qū)動(dòng)惡性生長(zhǎng)霍弹、干細(xì)胞維持和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT)，我們分析了我們的空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)娃弓，結(jié)果顯示 THY1 也始終與巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜共定位典格。 然后，我們對(duì) THY1 高與低區(qū)域進(jìn)行了基因本體通路富集分析台丛，結(jié)果顯示細(xì)胞粘附和細(xì)胞外基質(zhì)通路在高血管和低血管樣品中富含 THY1 的區(qū)域中高度上調(diào)耍缴，支持我們的體內(nèi)分析砾肺。 這些數(shù)據(jù)表明，THY1+ 細(xì)胞始終定位在一個(gè)共同的生態(tài)位內(nèi)防嗡，這表明在腫瘤微環(huán)境中的信號(hào)軸中發(fā)揮關(guān)鍵作用变汪，這有助于維持導(dǎo)致治療抗性的間充質(zhì)和癌癥干細(xì)胞表型。

圖片.png

圖片.png

圖片.png

圖片.png

圖片.png

圖片.png

DISCUSSION

盡管采用最大安全切除和 TMZ/IR 對(duì) GBM 進(jìn)行了積極治療蚁趁，但復(fù)發(fā)是不可避免的裙盾，驅(qū)動(dòng)耐藥的治療可行機(jī)制尚未確定。 為了表征 GBM 治療耐藥性發(fā)展的分子基礎(chǔ)他嫡，開(kāi)發(fā)并分析了臨床前體內(nèi)復(fù)發(fā)模型以及患者衍生活檢的空間分析番官。 所描述研究的一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)表明，在未經(jīng)治療的 GBM 中钢属，少數(shù)預(yù)先存在的徘熔、抗治療的腫瘤細(xì)胞可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。 具體來(lái)說(shuō)淆党，這種 THY1+ 細(xì)胞群位于血管周圍的腫瘤生態(tài)位中酷师，強(qiáng)烈表達(dá) EMT 和干細(xì)胞特征，并與巨噬細(xì)胞共定位染乌。 研究結(jié)果還表明山孔，在驅(qū)動(dòng)間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的血管周圍腫瘤微環(huán)境中，表達(dá) THY1 的細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間的關(guān)鍵細(xì)胞間相互作用可能導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)慕匠。

我們開(kāi)發(fā)的 GBM 復(fù)發(fā)模型概括了臨床治療范式饱须，并在復(fù)發(fā)時(shí)產(chǎn)生了高度耐藥的腫瘤。最值得注意的是台谊，與治療前活檢相比蓉媳，復(fù)發(fā)活檢中 THY1 的表達(dá)增加了 100 倍以上。然后锅铅，使用 THY1 作為細(xì)胞表面標(biāo)記物酪呻，從未接受過(guò)治療的腫瘤中分離出一群細(xì)胞，這些細(xì)胞概括了復(fù)發(fā)腫瘤樣本的治療抗性表型盐须。這些結(jié)果的生物學(xué)意義和臨床相關(guān)性通過(guò)以下發(fā)現(xiàn)得到進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)：THY1 表達(dá)在大多數(shù)患者復(fù)發(fā)時(shí)顯著上調(diào)玩荠，并且 THY1 表達(dá)增加與更差的無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期相關(guān)。盡管之前已經(jīng)描述了 GBM 中預(yù)先存在的抗治療細(xì)胞的克隆選擇贼邓，但這里提出的研究結(jié)果為這一概念提供了強(qiáng)有力的證明阶冈，并確定了表征該細(xì)胞群的特定表型和基因表達(dá)譜。

來(lái)自同一只小鼠的重復(fù)配對(duì)預(yù)處理和復(fù)發(fā)腫瘤的基因表達(dá)分析表明塑径，耐藥表型的發(fā)展也與間充質(zhì)轉(zhuǎn)化女坑、干性、細(xì)胞粘附和細(xì)胞外基質(zhì)成分相關(guān)基因的表達(dá)升高有關(guān)统舀，以及與細(xì)胞死亡相關(guān)的基因下調(diào)匆骗。間充質(zhì)基因表達(dá)特征源于上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 的生物學(xué)過(guò)程劳景，其特點(diǎn)是在許多惡性腫瘤中侵襲和轉(zhuǎn)移的能力增強(qiáng)。在這里碉就，我們將 THY1 提名為最
在 GBM 中獲得具有干細(xì)胞特性的間充質(zhì)表型的細(xì)胞中的膜蛋白顯著上調(diào)盟广。 THY1 是一種細(xì)胞表面受體，已在幾種非病理細(xì)胞類型中被鑒定出來(lái)瓮钥，對(duì)細(xì)胞間通訊以及細(xì)胞-基質(zhì)相互作用至關(guān)重要筋量，從而導(dǎo)致許多生理過(guò)程，包括增殖骏庸、粘附和遷移毛甲。 THY1 已在多種惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn)年叮，包括腎細(xì)胞癌具被、乳腺癌、肝細(xì)胞癌只损、卵巢癌和胰腺腫瘤一姿，并且與侵襲、轉(zhuǎn)移跃惫、免疫逃避和預(yù)后不良有關(guān)叮叹，所有這些都是 EMT 的標(biāo)志。

來(lái)自同一只小鼠的重復(fù)配對(duì)預(yù)處理和復(fù)發(fā)腫瘤的基因表達(dá)分析表明爆存，耐藥表型的發(fā)展也與間充質(zhì)轉(zhuǎn)化蛉顽、干性、細(xì)胞粘附和細(xì)胞外基質(zhì)成分相關(guān)基因的表達(dá)升高有關(guān)先较，以及與細(xì)胞死亡相關(guān)的基因下調(diào)携冤。間充質(zhì)基因表達(dá)特征源于上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 的生物學(xué)過(guò)程，其特點(diǎn)是在許多惡性腫瘤中侵襲和轉(zhuǎn)移的能力增強(qiáng)闲勺。在這里曾棕，我們將 THY1 提名為細(xì)胞中最顯著上調(diào)的膜蛋白之一，在 GBM 中獲得具有干細(xì)胞特性的間充質(zhì)表型菜循。 THY1 是一種細(xì)胞表面受體翘地，已在幾種非病理細(xì)胞類型中被鑒定出來(lái)，對(duì)細(xì)胞間通訊以及細(xì)胞-基質(zhì)相互作用至關(guān)重要癌幕，從而導(dǎo)致許多生理過(guò)程衙耕，包括增殖、粘附和遷移勺远。 THY1 已在多種惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn)橙喘，包括腎細(xì)胞癌、乳腺癌谚中、肝細(xì)胞癌渴杆、卵巢癌和胰腺腫瘤寥枝，并且與侵襲、轉(zhuǎn)移磁奖、免疫逃避和預(yù)后不良有關(guān)囊拜，所有這些都是 EMT 的標(biāo)志。

在我們的配對(duì)體內(nèi)分析中比搭，具有 THY1 上調(diào)的復(fù)發(fā)樣本也顯著增加了與細(xì)胞形態(tài)發(fā)生冠跷、細(xì)胞 - 細(xì)胞接觸以及細(xì)胞粘附和細(xì)胞外結(jié)構(gòu)組織相關(guān)的基因的表達(dá)。 我們對(duì)人類 GBM 標(biāo)本的基因本體通路富集分析證實(shí)了這些結(jié)果身诺。 這些細(xì)胞通路介導(dǎo)生長(zhǎng)蜜托、遷移、存活霉赡、分化和抗細(xì)胞死亡的信號(hào)橄务。 Avril 等人證明 THY1/CD90+ 腫瘤與侵襲性和多灶性腫瘤呈現(xiàn)的相關(guān)性增加。 這些研究進(jìn)一步支持了 THY1 在細(xì)胞間通訊和遷移介導(dǎo)治療抗性中的作用穴亏。

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療耐藥性是由細(xì)胞和微環(huán)境水平上顯著的腫瘤間和腫瘤內(nèi)異質(zhì)性驅(qū)動(dòng)的蜂挪。在腫瘤微環(huán)境 (TME) 的背景下，不同的腫瘤生態(tài)位嗓化，特別是血管周圍棠涮、缺氧和侵襲性腫瘤生態(tài)位，已被證明富含抗治療的癌癥干細(xì)胞群刺覆。這些生態(tài)位支持耐藥群體并在腫瘤復(fù)發(fā)中發(fā)揮關(guān)鍵作用严肪，因?yàn)橹委熾y治細(xì)胞和鄰近細(xì)胞（包括免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞谦屑、分化癌驳糯、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞）之間的相互作用驅(qū)動(dòng)靜止伦仍、侵襲结窘、免疫抑制以及促進(jìn)治療抵抗的其他特征。為了靶向這些干細(xì)胞樣充蓝、抗治療細(xì)胞隧枫，需要更好地了解在局部 TME 環(huán)境中促進(jìn)抗性表型的信號(hào)級(jí)聯(lián)。最近開(kāi)發(fā)的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué) (ST) 技術(shù)提供了原位詢問(wèn)整個(gè)轉(zhuǎn)錄組表達(dá)分析的能力谓苟，從而可以評(píng)估局部腫瘤微環(huán)境官脓。由于強(qiáng)有力且可重復(fù)的證據(jù)表明 THY1 陽(yáng)性可作為治療抗性表型的標(biāo)志物，因此可作為空間標(biāo)志涝焙，我們對(duì)患者來(lái)源的 GBM 的圖像引導(dǎo)活檢進(jìn)行了 ST 分析卑笨。該分析以無(wú)監(jiān)督和空間幼稚的方式進(jìn)行，然后將基因表達(dá)數(shù)據(jù)疊加到原始 H+E 成像上仑撞。我們發(fā)現(xiàn)赤兴，在對(duì)單個(gè) GBM 的高灌注和低灌注區(qū)域的分析中妖滔，THY1 表達(dá)始終與間充質(zhì)和莖樣特征共同定位，并且主要在血管周圍生態(tài)位中發(fā)現(xiàn)桶良，驗(yàn)證了我們?cè)谛∈竽Ｐ椭械难芯孔帷４送猓?strong>我們的 ST 研究揭示了 THY1 表達(dá)與巨噬細(xì)胞基因表達(dá)特征的共定位。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (TAM) 已被證明可以維持干細(xì)胞群陨帆，并通過(guò)多種相互作用促進(jìn)侵襲性和免疫逃避曲秉。例如，在乳腺癌中疲牵，TAM 被證明優(yōu)先滲入 THY1+ 區(qū)域承二，結(jié)合癌癥干細(xì)胞上的 THY1 受體，從而導(dǎo)致近分泌信號(hào)促進(jìn)侵襲性和支持干細(xì)胞生態(tài)位纲爸，激活 SRC 和 NFκB 信號(hào)級(jí)聯(lián)亥鸠。這些研究進(jìn)一步表明巨噬細(xì)胞的消耗導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)的停滯。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中缩焦，最近的一項(xiàng)研究表明读虏，THY1 表達(dá)增加與 SRC 磷酸化相關(guān)，并導(dǎo)致 SRC 抑制劑達(dá)沙替尼抑制 SRC 依賴性腫瘤細(xì)胞遷移以及細(xì)胞-基質(zhì)相互作用袁滥。有趣的是，最近的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)灾螃，局部 THY1+ 間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)增加腫瘤增殖和細(xì)胞遷移來(lái)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤進(jìn)展题翻。我們的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有文獻(xiàn)相結(jié)合，強(qiáng)調(diào)了 TME 內(nèi)細(xì)胞間相互作用在腫瘤進(jìn)展中的重要性以及 THY1 在其局部生態(tài)位內(nèi)旁分泌/近分泌信號(hào)傳導(dǎo)中的關(guān)鍵作用腰鬼。

我們的體內(nèi)復(fù)發(fā)性腫瘤顯示出具有 TGFβ 通路激活特征的間充質(zhì)基因表達(dá)譜嵌赠，這通過(guò)我們的患者來(lái)源組織的 ST 分析得到了進(jìn)一步驗(yàn)證。許多研究已經(jīng)獨(dú)立地證明了 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)在小鼠模型中的治療抗性熄赡、干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)姜挺、神經(jīng)球形成能力以及致瘤潛力中的作用。此外彼硫，抑制 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)與乳腺癌炊豪、白血病和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中干細(xì)胞群的消耗有關(guān)。我們的研究結(jié)果支持這一點(diǎn)拧篮，因?yàn)槭褂?LY2109761 抑制 TGFβ 信號(hào)傳導(dǎo)會(huì)降低間充質(zhì)和干細(xì)胞樣基因的表達(dá)词渤。此外，用 LY2109761 治療復(fù)發(fā)性腫瘤恢復(fù)了對(duì) TMZ/IR 的敏感性串绩。重要的是缺虐，盡管 LY2109761 作為單一藥物的療效最低，但我們觀察到當(dāng)兩種方式結(jié)合使用時(shí)礁凡，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理 TMZ/IR 的敏感性顯著恢復(fù)高氮。如前所述慧妄，這一發(fā)現(xiàn)直接暗示 TGFβ 信號(hào)通路在賦予間充質(zhì)、干細(xì)胞樣剪芍、治療抗性表型方面腰涧。最近調(diào)查各種 TGFβ 抑制劑的臨床試驗(yàn)沒(méi)有顯示出前景，但通常單獨(dú)使用 TGFβ 抑制劑或與其他藥物（包括洛莫司臀珊啤）聯(lián)合使用窖铡。然而，我們的研究結(jié)果表明坊谁，TGFβ 抑制可能在復(fù)發(fā)環(huán)境中最有效地逆轉(zhuǎn)對(duì) TMZ/IR 的抗性费彼，特別是如果患者富含此處描述的間充質(zhì)和干細(xì)胞樣特征的表達(dá)。特定的耐藥途徑可能只發(fā)生在患者亞群中口芍，Wang 等人證實(shí)了這一點(diǎn)箍铲，他們?cè)?11% 的復(fù)發(fā)患者中發(fā)現(xiàn)了 LTBP4（一種已知的 TGFβ 途徑激活劑）的突變。因此鬓椭，確定可能受益于 TGFβ 靶向的患者亞組至關(guān)重要颠猴。 TGFβ信號(hào)通路和間充質(zhì)表型的激活也與修復(fù)DNA損傷的能力增強(qiáng)有關(guān)，從而通過(guò)幾種轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)致化學(xué)和放射抗性小染。例如翘瓮，在我們的復(fù)發(fā)樣本中上調(diào)的 ZEB2 已被證明會(huì)影響 DNA 損傷后的 ATM/ATR 活性。其同源物 ZEB1裤翩，通過(guò)調(diào)節(jié) CHK1 的穩(wěn)定性來(lái)促進(jìn)乳腺癌的放射抗性资盅，并通過(guò)調(diào)節(jié)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的 MGMT 來(lái)調(diào)節(jié) TMZ 敏感性。

復(fù)發(fā)的發(fā)展是一個(gè)鮮為人知的動(dòng)態(tài)過(guò)程踊赠。 許多人認(rèn)為呵扛，治療期間的進(jìn)化壓力導(dǎo)致克隆細(xì)胞的選擇與亞克隆細(xì)胞群的擴(kuò)增和突變。 我們的研究結(jié)果表明筐带，預(yù)先存在的腫瘤細(xì)胞亞克隆群的進(jìn)化和生長(zhǎng)也可能導(dǎo)致復(fù)發(fā)今穿。 Chowell 等人證明，未經(jīng)治療的腫瘤通常含有罕見(jiàn)的抗治療亞克隆伦籍，而這些亞克隆是標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)無(wú)法檢測(cè)到的蓝晒。 Kim 等人的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤復(fù)發(fā)的遺傳途徑可能是獨(dú)特的鸽斟，并且在檢查時(shí)難以預(yù)測(cè)
跨越多個(gè)樣本拔创。 其他人已經(jīng)證明來(lái)自單個(gè)腫瘤的各種亞克隆可以在體外表現(xiàn)出不同的治療反應(yīng)，并斷言該信息可用于預(yù)測(cè)臨床反應(yīng)富蓄。

最后剩燥，我們的研究提供了一種獨(dú)特的臨床相關(guān)小鼠模型來(lái)研究 GBM 的治療抗性，并定義了一種稀有細(xì)胞群，表達(dá)對(duì) TMZ/IR 治療具有內(nèi)在抗性的 THY1灭红。這種方法為探索腫瘤耐藥機(jī)制和對(duì)患者護(hù)理至關(guān)重要的治療干預(yù)提供了獨(dú)特的機(jī)會(huì)侣滩。盡管體內(nèi)免疫功能低下的小鼠模型不能完美地復(fù)制臨床范例或人類腫瘤微環(huán)境，但我們的研究結(jié)果已得到臨床研究結(jié)果的驗(yàn)證变擒。此外君珠，我們的人類空間轉(zhuǎn)錄組分析為人類腫瘤細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境之間的相互作用提供了額外的見(jiàn)解。在顱內(nèi)小鼠模型中使用患者衍生的外植體而不是永生化細(xì)胞系來(lái)評(píng)估對(duì)聯(lián)合治療的耐藥性的演變娇斑，使用基因組范圍的基因表達(dá)分析也提供了我們的研究結(jié)果接近臨床環(huán)境的信心策添。與臨床經(jīng)驗(yàn)一致，我們的結(jié)果表明輔助TMZ將總生存期從7周延長(zhǎng)至13周毫缆。動(dòng)物在接受 TMZ 輔助治療時(shí)出現(xiàn)復(fù)發(fā)表明腫瘤確實(shí)具有抗藥性唯竹。此外，在重新植入復(fù)發(fā)性腫瘤組織時(shí)重現(xiàn)了對(duì) TMZ/IR 的抗性的證明證實(shí)了這一結(jié)論苦丁。需要進(jìn)一步努力來(lái)確定固有抗性細(xì)胞如何通過(guò)血管周圍生態(tài)位內(nèi)的相互作用來(lái)驅(qū)動(dòng)復(fù)發(fā)浸颓，這可能導(dǎo)致確定靶向臨床益處的途徑。在這里描述的復(fù)發(fā)模型中旺拉，我們利用 TMZ/IR 的組合來(lái)評(píng)估治療抵抗的機(jī)制产上。盡管 TMZ 和 IR 的組合是 GBM 患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方法，但許多報(bào)告僅使用單一方式測(cè)試了 GBM 耐藥性的分子基礎(chǔ)蛾狗，這雖然很重要晋涣，但并未模仿臨床環(huán)境中耐藥性的出現(xiàn)。

生活很好淘太，有你更好