血液RNA該如何提取

BIOG產(chǎn)品特點

◎操作簡便快速得封,20分鐘左右可獲得理想的RNA同廉;

◎提取RNA純度高仪糖,無抑制劑,1.8<A260/A280≤2.0迫肖;

◎產(chǎn)量更高锅劝,較國內(nèi)同類產(chǎn)品高出20%;

◎樣本范圍廣蟆湖,可用于新鮮故爵、冷凍或陳舊的全血樣本。

產(chǎn)品介紹

BIOG Blood RNA Isolate Kit專門用于血液RNA的提取純化。本試劑盒采用獨特的裂解液配方诬垂,可直接從新鮮劲室、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的基因組RNA,也可以直接提取得到血液中感染的微生物或轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞RNA结窘, 省去了一般血液RNA提取試劑盒所需的白細胞分離步驟很洋,操作簡便快速,只需20分鐘左右即可完成血液RNA提取隧枫,并且RNA提取得率較高喉磁,可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因組RNA。BIOG Blood RNA Isolate Kit采用了最新的優(yōu)質(zhì)離子膜官脓,裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化协怒,提取得到的RNA純度更高,最大限度地去除了蛋白卑笨、色素孕暇、脂類等雜質(zhì)污染,可以直接應(yīng)用于Northern 雜交赤兴、RT-PCR妖滔、Real Time RT-PCR等。

操作步驟?請自行準備無水乙醇和1.5mLRNase-free滅菌離心管

1. 取出洗滌液搀缠,按以下操作:

a) 洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇铛楣;42mL加入18mL無水乙醇,混勻艺普。

b) 洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇簸州;18mL加入42mL無水乙醇,混勻歧譬。

c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀岸浑,可在37℃溶解,搖勻后使用瑰步。

2. 取1.5mLRNase-free滅菌離心管矢洲,加入200μL血液樣本,再加入200μL 裂解液及40μL 消化液缩焦,振蕩混勻读虏,65℃水浴10 分鐘。

3. 加入150μL異丙醇(總體積的25%)袁滥,混合均勻盖桥,如有半透明懸浮物,不影響RNA的提取與后續(xù)實驗题翻。

4. 將吸附柱放入收集管內(nèi)揩徊,將上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi),12,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液塑荒;

5. 將吸附柱放回收集管內(nèi)熄赡,加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 離心1 分鐘齿税,棄收集管內(nèi)廢液彼硫。

6. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)凌箕,12,000 rpm 離心1 分鐘乌助,棄收集管內(nèi)廢液。

7. 按每份樣本40μL 取洗脫液(如10份提取樣本陌知,即取400μL 洗脫液),放置于滅菌1.5mL離心管掖肋,65℃預(yù)熱仆葡。

8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000 rpm 離心2 分鐘志笼,離去殘留的洗滌液沿盅。

9. 取出吸附柱,放入新的1.5mL RNase-free滅菌離心管內(nèi)纫溃,在吸附柱中心加入40 μL預(yù)熱洗脫液腰涧,靜置2分鐘,12,000 rpm 離心1分鐘紊浩,收集RNA溶液窖铡。提取的RNA即可用于下一步實驗或-70℃保存。

注意事項:

1.裂解液坊谁、洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì)费彼,操作過程請做好防護措施,避免直接接觸皮膚口芍,防止吸入口鼻箍铲。如不慎沾染皮膚或眼睛,請立即用清水或生理鹽水沖洗鬓椭,必要時請就醫(yī)颠猴。

2.如血液量不足200μL,請用0.85% 生理鹽水補至200μL小染;如血液量超出200μL翘瓮,請使用BIOG中量血液RNA提取試劑盒或BIOG血液富集RNA提取試劑盒。

3. 如果提取的血液為鳥類氧映、禽類的血液春畔,因有核紅細胞較多,提取血液量應(yīng)適當減少,研究者應(yīng)先進行優(yōu)化實驗律姨,選擇合適用量振峻。

4.為防RNA酶污染,實驗過程中最好戴一次性干凈手套择份、口罩扣孟,使用處理過的無RNA酶的容器和無RNA酶的超純水。

5.提取的RNA如暫不使用荣赶,應(yīng)-70℃保存凤价,可適當加入RNA保護因子(貨號:51090,一般40μLRNA溶液加入2μL)拔创。

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