2023年11月21，bioRxiv發(fā)表了Peter N. Dodds團(tuán)隊(duì)題為“AvrSr27 is a zinc-bound effector with a modular structure important for immune recognition”的研究論文。該論文解析了稈銹菌無毒基因AvrSr27的晶體結(jié)構(gòu)者春。https://doi.org/10.1101/2023.11.21.567997

稈銹病炉擅，由真菌病原菌Puccinia graminis f. sp. tritici?(Pgt)引起辉懒。小麥病原菌( Pgt ) 是小麥生產(chǎn)和全球糧食安全的主要威脅。Pgt成功定殖的核心是促進(jìn)感染和定植的蛋白質(zhì)效應(yīng)子的分泌谍失，而小麥的免疫是由受體介導(dǎo)的對這些效應(yīng)子的識(shí)別驅(qū)動(dòng)的眶俩，從而導(dǎo)致病原體無毒力。在這里快鱼，我們報(bào)告了富含半胱氨酸的效應(yīng)子 AvrSr27 的晶體結(jié)構(gòu)颠印，這是Pgt效應(yīng)子的第三個(gè)實(shí)驗(yàn)衍生結(jié)構(gòu)。AvrSr27 結(jié)構(gòu)揭示了一種新穎的富含 β 鏈的模塊化折疊抹竹，由兩個(gè)結(jié)構(gòu)相似的域組成线罕，并證實(shí)了我們從 AlphaFold2 衍生模型中獲得的不良預(yù)測。蛋白質(zhì)內(nèi)高度普遍的半胱氨酸殘基促進(jìn) 4 個(gè)鋅分子的協(xié)調(diào)窃判。利用該結(jié)構(gòu)钞楼，我們表明 AvrSr27 的 N 末端結(jié)構(gòu)域足以進(jìn)行 Sr27 的免疫識(shí)別和相互作用。每個(gè) AvrSr27 結(jié)構(gòu)域中的 7-cys 基序序列有助于鋅結(jié)合袄琳，也在兩種吸器表達(dá)询件、結(jié)構(gòu)同源的Pgt蛋白中發(fā)現(xiàn)。值得注意的是唆樊，盡管序列同一性相對較低宛琅，但我們發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)可以與 Sr27 結(jié)合并觸發(fā)異源系統(tǒng)和小麥原生質(zhì)體中的細(xì)胞死亡，盡管比 AvrSr27 弱窗轩『煌海總的來說，我們的研究結(jié)果對于開展免疫受體定制工程作為植物病害解決方案的領(lǐng)域具有重要意義痢艺。

AvrSr27 是一種金屬結(jié)合效應(yīng)子仓洼，優(yōu)先結(jié)合鋅離子

三個(gè) AvrSr27 變體在AlphaFold2 (AF2) 數(shù)據(jù)庫中的模型有很大不同，并且所有置信度分?jǐn)?shù)較低堤舒。作者利用AF2v2.3.0 再次進(jìn)行了預(yù)測色建，并再次發(fā)現(xiàn)盡管模型整體的置信度較高，但這三個(gè)變體的模型之間仍存在顯著差異舌缤。因此箕戳，該團(tuán)隊(duì)試圖通過試驗(yàn)確定 AvrSr27 蛋白的結(jié)構(gòu)某残。

首先將帶有 N 端可切割 6xHis 標(biāo)簽的 avrSr27-3 在大腸桿菌菌株 SHuffle?中表達(dá)（氧化環(huán)境）或BL21（還原環(huán)境）。使用鎳親和力和尺寸排阻層析 (SEC) 將蛋白質(zhì)純化至均質(zhì)陵吸。SEC 和 SDS-PAGE（等體積上樣）的 avrSr27-3 峰的比較表明玻墅，BL21 的總蛋白產(chǎn)量比 SHuffle? 高約 10 倍（圖 1A ）。這表明在還原條件下有利于蛋白質(zhì)產(chǎn)生壮虫，并表明半胱氨酸可能被還原澳厢。通過完整質(zhì)譜 (MS) 測量，由 BL21 或 SHuffle? 產(chǎn)生的 avrSr27-3 的單一同位素質(zhì)量囚似，對應(yīng)于與蛋白質(zhì)還原形式相關(guān)的預(yù)期理論分子質(zhì)量 (13518 Da)（圖 1B ）剩拢。為了進(jìn)一步證實(shí)這一觀察結(jié)果，BL21 產(chǎn)生的 avrSr27-3 用碘乙胺 (IAA) 進(jìn)行烷基化饶唤，這導(dǎo)致每個(gè)游離硫醇/硫醇鹽基團(tuán)的質(zhì)量增加 57 Da徐伐。測量的質(zhì)量顯示出一系列峰，每個(gè)峰相距 57 Da募狂，表明發(fā)生了不完全烷基化办素。由于結(jié)合的金屬離子可能阻礙烷基化，我們在用金屬螯合劑 EDTA 預(yù)處理后進(jìn)行烷基化熬尺，觀察到單同位素質(zhì)量為 14316 Da 的單峰摸屠，與所有半胱氨酸殘基的完全烷基化一致（圖 1B ）。

為了測試 avrSr27-3 是否與金屬離子共純化粱哼，我們在補(bǔ)充有痕量金屬溶液的培養(yǎng)基中表達(dá)蛋白質(zhì)季二，隨后在顯色螯合劑 4L(2Lpyridylazo) 間苯二酚 (PAR) 存在下使純化的蛋白質(zhì)變性。游離 PAR 的最大吸收波長為 416 nm揭措，當(dāng)形成 PAR-金屬離子絡(luò)合物時(shí)胯舷，吸收波長會(huì)轉(zhuǎn)移至~500 nm（金屬相關(guān)）。將 PAR 與 avrSr27-3（變性以釋放金屬離子）一起孵育后绊含，觀察到吸光度峰移動(dòng)至~500 nm桑嘶，這與 PAR-金屬復(fù)合物的形成一致（圖 1D ）。將 PAR 與 AvrP（一種已知的金屬結(jié)合效應(yīng)子）一起孵育時(shí)也觀察到類似的變化躬充。我們使用電感耦合等離子體質(zhì)譜 (ICP-MS) 確認(rèn)了 AvrSr27 中金屬結(jié)合的身份和化學(xué)計(jì)量逃顶。發(fā)現(xiàn)AvrSr27僅與鋅離子結(jié)合，每個(gè)AvrSr27單體平均占據(jù)2.04個(gè)鋅離子（圖1D）充甚。為了評(píng)估 AvrSr27 對金屬的特異性和親和力以政，我們使用了微尺度熱泳 (MST)。我們首先試圖通過在非變性條件下用 EDTA 處理來去除 AvrSr27 中結(jié)合的鋅伴找，但隨后使用 PAR 測定和 ICP-MS（SEC 后）進(jìn)行的分析表明盈蛮，AvrSr27 仍然與鋅結(jié)合，其比率與未處理的樣品相似（每個(gè) AvrSr27 單體約 1.7 個(gè)鋅離子）技矮。盡管如此抖誉，使用四種過渡金屬（Zn 2+殊轴、Mg 2+、Ni 2+袒炉、Fe 2+）對該蛋白質(zhì)進(jìn)行的結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明旁理，該蛋白質(zhì)仍然可以容納其他金屬。Zn 的親和力最高（Kd 為 5.2 ± 0.74 μM）我磁，而 Ni 的親和力則低得多（Kd 72.8 ± 7.2 μM）韧拒。沒有觀察到Mg 2+或Fe 2+的結(jié)合∈裕總的來說，這些數(shù)據(jù)表明 AvrSr27 可以優(yōu)先結(jié)合鋅塑悼，并且每個(gè)分子可能容納 ≥2 個(gè)鋅離子劲适。

AvrSr27 的結(jié)構(gòu)是一個(gè)新穎的重復(fù)結(jié)構(gòu)域

為了闡明 AvrSr27 的結(jié)構(gòu)，在大腸桿菌BL21中產(chǎn)生了三個(gè)等位基因厢蒜，并在金屬交換步驟后進(jìn)行結(jié)晶篩選霞势，以創(chuàng)建均質(zhì)的載鋅蛋白質(zhì)樣品。獲得了 AvrSr27-1 晶體斑鸦，并使用鋅單波長反常衍射 (SAD) 方法將結(jié)構(gòu)解析為最終分辨率 2.4 ?愕贡。

該結(jié)構(gòu)由兩個(gè)反平行β片層和一個(gè)短C端螺旋組成（圖2A）。在該結(jié)構(gòu)中巷屿，有四個(gè)鋅離子固以，每個(gè)鋅離子通過四個(gè)半胱氨酸殘基（CCCC；Zn2和Zn4）或三個(gè)半胱氨酸和一個(gè)組氨酸（CCCH嘱巾；Zn1和Zn3）與四面體配位幾何結(jié)構(gòu)結(jié)合（圖2B ）憨琳。兩個(gè) β 片層元件（分別為殘基 32-86 和 87-146），每個(gè)元件都有兩個(gè) Zn 配位位點(diǎn)旬昭，結(jié)構(gòu)相似（51 個(gè)對齊殘基的均方根偏差 (RMSD) 為 2.5 ?篙螟；圖2C） ，表示重復(fù)的域问拘，其中第二個(gè)域相對于第一個(gè)域旋轉(zhuǎn) 180 度遍略。每個(gè)結(jié)構(gòu)域包含兩個(gè)具有替代配位幾何形狀的鋅配位位點(diǎn)（CCCH 和 CCCC）。

有趣的是骤坐，在第一個(gè)鋅配位位點(diǎn)（Zn1）中绪杏，三個(gè)半胱氨酸殘基（C37、C66和C69）與位于C端螺旋的組氨酸（H141）一起配位鋅離子（圖2B 或油， C )寞忿，它環(huán)繞以穩(wěn)定蛋白質(zhì)的整體折疊。與 AlphaFold2 v2.3.0 預(yù)測的比較表明顶岸，AvrSr27-1 和 avrSr27-3 的預(yù)測結(jié)構(gòu)與我們實(shí)驗(yàn)確定的結(jié)構(gòu)相似（104 個(gè)和 92 個(gè)殘基的 RMSD 分別為~3 ?）腔彰，但是不是 AvrSr27-2叫编。AvrSr27-1 的 AlphaFold2 (AF2) 預(yù)測中鋅配位殘基的位置是準(zhǔn)確的，除了第一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的配位 His 殘基不同（晶體結(jié)構(gòu)中的 His33 與 His141） 霹抛。此外搓逾，avrSr27-3 AF2 結(jié)構(gòu)預(yù)測了 Zn 配位點(diǎn)中半胱氨酸殘基之間的幾個(gè)二硫鍵。

AvrSr27-1 在效應(yīng)子中具有新穎的結(jié)構(gòu)杯拐，盡管在使用 DALI 網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器對蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫 (PDB) 進(jìn)行結(jié)構(gòu)搜索后霞篡，觀察到與分子伴侶、HSP70 和 DnaK 的底物結(jié)合域的結(jié)構(gòu)相似性有限端逼。然而朗兵，與 AvrSr27 蛋白不同，這些結(jié)構(gòu)域不結(jié)合金屬離子顶滩，AvrSr27 也不包含 HSP70 和 DnaK 功能所需的額外核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域余掖，這表明它不太可能具有相同的功能作用。

對來自Pgt的兩種蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)信息鑒定礁鲁，這些蛋白質(zhì)可被 Sr27 識(shí)別并直接與 Sr27 相互作用

AvrSr27 的兩個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)域在 Zn 配位半胱氨酸殘基之間包含相同的間距（圖 2C）盐欺。對該基序（CX 13 CX 2 CX 11 CX 2 CX 9 CX 4 C；其中 X 是任何殘基）的搜索從Pgt21-0分泌組中鑒定出兩種蛋白質(zhì)：Pgt21-028479 和 Pgt21-027343仅醇。這些蛋白質(zhì)彼此之間具有~95%的序列同一性冗美，與三個(gè)AvrSr27等位基因具有~50%的序列同一性（圖3A），并且在吸器中高度表達(dá)析二。鑒于> 30％序列同一性的蛋白質(zhì)通常采用相似的折疊粉洼，我們預(yù)測Pgt21-028479和Pgt21-027343是AvrSr27的結(jié)構(gòu)同源物。

有趣的是甲抖，Pgt21-027343與Sr27在本塞姆氏煙草中的瞬時(shí)共表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞死亡響應(yīng)漆改，比AvrSr27-1稍弱，而Pgt21-028479產(chǎn)生相當(dāng)弱的響應(yīng)准谚，表明這兩種蛋白都可以被Sr27識(shí)別（圖3B）挫剑。AvrSr50 與 Sr27 的共表達(dá)被納入作為陰性對照（圖 3B-C），而當(dāng)與 YFP 共滲透時(shí)柱衔，觀察到 Pgt21-027343 或 Pgt21-028479 缺乏細(xì)胞死亡樊破，表明細(xì)胞死亡是依賴于 Sr27 識(shí)別。Pgt21-027343或Pgt21-028479與Sr27在小麥原生質(zhì)體中的共表達(dá)也導(dǎo)致細(xì)胞死亡唆铐，如通過表達(dá)報(bào)道分子YFP的活細(xì)胞百分比下降所檢測到的（圖3D ）哲戚。單獨(dú)表達(dá)Pgt21-027343或Pgt21-028479沒有顯示出反應(yīng)，而Sr27與AvrSr50的共表達(dá)也沒有顯示出反應(yīng)艾岂。

引入RUBY報(bào)告系統(tǒng)檢測Sr27和AvrSr27之間的互作

之前的推文中介紹過利用引入RUBY報(bào)告系統(tǒng)檢測Sr27和AvrSr27之間的互作顺少。想了解的朋友可以點(diǎn)擊下面鏈接閱讀。

RUBY報(bào)告系統(tǒng) | 一種新的可直接通過肉眼觀察植物組織累積紅色甜菜堿的報(bào)告系統(tǒng)

Sr27和AvrSr27之間的互作檢測

我們最近使用植物雙雜交測定表明，Sr27 與 AvrSr27-1脆炎、-2 和 -3 物理結(jié)合梅猿，其中 Ruby 報(bào)告基因產(chǎn)生的紫色色素甜菜紅素可作為蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的讀數(shù)。GAL4BD-Sr27與VP16融合的Pgt21-028479和Pgt21-027343的共表達(dá)導(dǎo)致UAS（上游激活序列）-Ruby報(bào)告基因的激活和甜菜紅素的產(chǎn)生（圖3E）秒裕，表明這些之間的物理關(guān)聯(lián)效應(yīng)蛋白和Sr27袱蚓。然而，盡管蛋白質(zhì)積累到與免疫印跡檢測到的相似水平几蜻，但甜菜堿積累顯著低于Sr27-AvrSr27-1陽性對照觀察到的水平（圖3E）喇潘，這表明Pgt21-028479 /Sr27 和 Pgt21-27343/Sr27 關(guān)聯(lián)較弱。

AvrSr27 的 N 端結(jié)構(gòu)域足以識(shí)別并與 Sr27 關(guān)聯(lián)

為了研究 Sr27 與 AvrSr27 和 AvrSr27 樣蛋白之間相互作用的要求梭稚，我們將蛋白分為 N 端和 C 端結(jié)構(gòu)域颖低。對于三個(gè) AvrSr27 等位基因，創(chuàng)建了一個(gè)額外的較短構(gòu)建體（殘基 35-86弧烤，稱為 AvrSr27-N-short）枫甲，它排除了兩個(gè) N 端 His 殘基，這可能在缺乏 Zn 配位點(diǎn)的情況下完成第一個(gè) Zn 配位位點(diǎn)這些片段中有 His141（圖 2）扼褪。

在本塞姆氏煙草和煙草中與Sr27瞬時(shí)共表達(dá)后，所有AvrSr27 N-末端構(gòu)建體都觀察到強(qiáng)烈的細(xì)胞死亡反應(yīng)粱栖，類似于全長AvrSr27蛋白（圖4A）话浇。然而，對于AvrSr27-1和AvrSr27-2 C端結(jié)構(gòu)域觀察到很少或沒有細(xì)胞死亡闹究，而對于avrSr27-3僅觀察到微弱的反應(yīng)(圖4A)幔崖。與 AvrSr27 等位基因不同，Pgt21-027343 和 Pgt21-028479 的 N 端或 C 端構(gòu)建體均未觀察到細(xì)胞死亡渣淤，當(dāng) N 端和 C 端構(gòu)建體共表達(dá)時(shí)赏寇，也無法恢復(fù)對這些蛋白質(zhì)片段的識(shí)別。與 Sr27 一起（圖 4B）价认。

這里作者也利用RUBY報(bào)告系統(tǒng)檢測了互作強(qiáng)度嗅定。

為了研究 AvrSr27 N 末端結(jié)構(gòu)域是否維持了 Sr27 物理關(guān)聯(lián)，我們像以前一樣進(jìn)行了植物內(nèi)雙雜交測定并評(píng)估了甜菜紅素的產(chǎn)生用踩。對于AvrSr27-1渠退，當(dāng)與GAL4BD-Sr27共表達(dá)時(shí)，N端長片段和短片段產(chǎn)生甜菜堿積累脐彩，但略少于全長蛋白（圖4C）碎乃，而N端長片段和短片段則產(chǎn)生甜菜堿積累。AvrSr27-2的（短）片段給出了與全長蛋白質(zhì)相似的水平（圖4C）并且avrSr27-3 N-末端（短）結(jié)構(gòu)域顯示出與全長蛋白質(zhì)相似的相互作用惠奸。在 AvrSr27 C 端結(jié)構(gòu)域梅誓、Pgt21-028479 和 Pgt21-027343 N 或 C 結(jié)構(gòu)域分裂共滲透后，甜菜堿幾乎沒有積累（圖 3C）。所有構(gòu)建體的蛋白質(zhì)表達(dá)水平相似梗掰。

討論

確定宿主免疫受體效應(yīng)子識(shí)別的分子基礎(chǔ)對于了解病原體種群毒力特征的進(jìn)化非常重要嵌言，并且可以支持成功部署針對植物病原體的現(xiàn)有遺傳抗性，例如 Pgt愧怜。小麥免疫受體 Sr27呀页、Sr35和Sr50 與Pgt中相應(yīng)的 Avr 蛋白之間的識(shí)別是通過直接蛋白質(zhì)相互作用介導(dǎo)的。我們之前發(fā)現(xiàn)拥坛，單個(gè)氨基酸表面暴露殘基的突變足以使 AvrSr50 的毒力等位基因逃避 Sr50 免疫受體的識(shí)別蓬蝶，并確定了相互作用表面的一部分。

許多來自絲狀植物病原體的候選效應(yīng)蛋白富含半胱氨酸殘基猜惋，這些殘基通常被認(rèn)為參與分子內(nèi)和分子間二硫鍵丸氛，提供結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。很大程度上著摔，這對于定位于質(zhì)外體的效應(yīng)蛋白來說是正確的缓窜。相反，遞送到胞質(zhì)溶膠的效應(yīng)子往往二硫鍵（和半胱氨酸含量）較低谍咆，并且雖然存在含有二硫鍵的細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)子的例子（例如來自 Magnaporthe oryzae 的 MAX 效應(yīng)子和來自 Pyrenophora tritici-repentis 的 ToxA）禾锤，但這些效應(yīng)子并不必需的半胱氨酸豐富。在這項(xiàng)研究之前摹察，兩個(gè)富含半胱氨酸的細(xì)胞質(zhì)定位效應(yīng)子（來自亞麻銹病真菌M. lini的 AvrP 和來自稻瘟病菌M. oryzae的 AvrPii）的結(jié)構(gòu)特征表明恩掷，半胱氨酸參與其中配位鋅離子。

AvrSr27供嚎、AvrP 和 AvrPii 均通過半胱氨酸配位結(jié)合金屬離子黄娘，這表明這可能是富含 cys 的細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)子的共同特征，但其功能仍不清楚克滴。已知鋅和其他金屬離子的結(jié)合在確保蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和誘導(dǎo)正確折疊方面發(fā)揮結(jié)構(gòu)作用逼争，其代替二硫鍵可以在分泌到植物細(xì)胞后提供剛性和保護(hù)。然而劝赔，鋅也被證明對于許多酶的催化活性至關(guān)重要誓焦。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，蛋白質(zhì)內(nèi)鋅離子的功能取決于配位環(huán)境着帽，并且在這些效應(yīng)子結(jié)構(gòu)中觀察到的鋅的四面體（CCCC 和 CCCH）配位更能代表結(jié)構(gòu)作用罩阵。另一個(gè)有趣的可能性是，在感染過程中启摄，真菌中可能會(huì)產(chǎn)生未結(jié)合鋅的金屬結(jié)合效應(yīng)物稿壁，然后在遞送至宿主后可將鋅隔離在植物細(xì)胞內(nèi)。鋅離子和其他過渡金屬在植物生長和生理學(xué)中發(fā)揮著重要作用歉备，包括響應(yīng)非生物或生物脅迫傅是，并且它們的細(xì)胞內(nèi)濃度受到嚴(yán)格調(diào)節(jié)以維持生物過程。據(jù)報(bào)道，局部高濃度的鋅對細(xì)菌和真菌有毒喧笔，并且為了應(yīng)對病原體的攻擊帽驯，植物可以提高局部鋅的濃度，從而創(chuàng)造有毒的书闸、不適宜居住的環(huán)境尼变，或激活其他植物防御過程。例如浆劲，據(jù)報(bào)道嫌术，鋅可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和活性氧（ROS）的產(chǎn)生，這對Pgt等生物營養(yǎng)病原體有效牌借。

在過去幾年中度气，基于人工智能的結(jié)構(gòu)預(yù)測器（例如 AlphaFold2）取得了重大進(jìn)展，并已被證明在效應(yīng)子研究中非常有用膨报。盡管如此磷籍，效應(yīng)子預(yù)測的準(zhǔn)確性（與實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)相比）仍然存在差異∠帜可能造成這種情況的一個(gè)因素是多重序列比對的進(jìn)化深度院领，它支撐著AlphaFold2，盡管在某些情況下仍不清楚够吩。對于 AvrSr27（變體和結(jié)構(gòu)同源物）栅盲，盡管序列保守性較高，但預(yù)測結(jié)果普遍較差且存在差異（圖 S1A废恋、S6C）。我們認(rèn)為鋅作為 AvrSr27 輔助因子的貢獻(xiàn)以及當(dāng)前深度學(xué)習(xí)結(jié)構(gòu)預(yù)測算法在預(yù)測過程中無法納入輔助因子可能是造成這種情況的原因扒寄。盡管我們注意到 AlphaFold2 在某些情況下已顯示出正確預(yù)測鋅配位位點(diǎn)的能力鱼鼓。

AvrSr27 的模塊化結(jié)構(gòu)對宿主 Sr27 免疫受體的識(shí)別具有影響。AvrSr27 的 N 端結(jié)構(gòu)域足以識(shí)別并與 Sr27 直接相互作用该编，而 C 端結(jié)構(gòu)域則不被識(shí)別迄本。出乎意料的是，當(dāng)作為全長蛋白共表達(dá)時(shí)课竣，兩個(gè) AvrSr27 樣結(jié)構(gòu)同源物（Pgt21-027343 和 Pgt21-028479）也可以與 Sr27 相互作用并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡嘉赎，但它們的 N 端和 C 端結(jié)構(gòu)域均未被識(shí)別。這種明顯的差異表明于樟，在 AvrSr27 等位基因中存在參與介導(dǎo)這種相互作用的保守表面暴露殘基公条，這些殘基與 AvrSr27 樣結(jié)構(gòu)同源物不同。Pgt21-027343 和 Pgt21-028479 在吸器中和感染期間表現(xiàn)出高表達(dá)迂曲，但不賦予無毒力表型靶橱，因?yàn)閷?Sr27 有毒的突變體保留了這些基因的完整。感染期間未能觸發(fā)耐藥性可能是由于與 AvrSr27 變體相比，這些蛋白質(zhì)與 Sr27 之間的關(guān)聯(lián)較弱（圖 3B关霸、C）传黄。或者队寇，雖然在真菌中轉(zhuǎn)錄膘掰，但這些基因可能無法有效翻譯，或者翻譯的產(chǎn)物可能無法遞送至宿主佳遣。另一種可能性是這些雙結(jié)構(gòu)域蛋白在感染過程中被加工成單結(jié)構(gòu)域识埋，這與 Sr27 可以識(shí)別 AvrSr27 蛋白的 N 端結(jié)構(gòu)域但不能識(shí)別 Pgt21-027343 和 Pgt21-028479 的 N 端結(jié)構(gòu)域的觀察結(jié)果一致（圖 1）。4A苍日、B )惭聂。

可以說我們隊(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述，應(yīng)該總是圍繞某一具體生物學(xué)過程相恃。

連同之前在植物中觀察到的由低表達(dá)avrSr27-3毒力等位基因編碼的蛋白質(zhì)的識(shí)別辜纲，這些數(shù)據(jù)表明共表達(dá)的 R 和 Avr 蛋白質(zhì)之間的識(shí)別可能并不總是與感染期間的抗性/毒力表型相關(guān)。因此在缺乏感染表型數(shù)據(jù)的情況下解釋此類實(shí)驗(yàn)時(shí)需要謹(jǐn)慎拦耐。

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