細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無菌茧吊、適宜溫度亭引、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等）绎速，使之生存、生長痛侍、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法朝氓。
細胞培養(yǎng)也可以稱為叫細胞克隆技術魔市，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術主届。不論對于整個生物工程技術赵哲，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養(yǎng)都是一個克隆的過程君丁，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)姆愣幔克隆。
細胞培養(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞绘闷，這是克隆技術的環(huán)節(jié)橡庞，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術印蔗，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞扒最，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝华嘹、細胞的生長增殖等吧趣。
細胞培養(yǎng)不是一個簡單的操作，在這其中我們需要極其嚴謹?shù)娜獙Π液瘢苍S稍有不慎就會在某一個環(huán)節(jié)上出錯導致后續(xù)培養(yǎng)失敗强挫。
那我們應該注意哪些方面呢？下文就先為大家介紹到影響培養(yǎng)的一系列因素薛躬。
一俯渤、影響細胞培養(yǎng)的環(huán)境因素有哪些：
1．無菌環(huán)境
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件。細胞在活體內型宝，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質的入侵八匠，但細胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質的解毒能力趴酣。為保證細胞能在體外環(huán)境中生長繁殖臀叙，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生价卤、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作劝萤。
常見的微生物污染有支原體、細菌慎璧、真菌床嫌。支原體無致死毒性，可與細胞長期共存胸私，對細胞有潛在影響厌处，但體積小，不易鑒別岁疼，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測阔涉。細菌增殖快缆娃，在短時間內即可大量擴增，并產生毒素殺死細胞瑰排。真菌的種類繁多贯要，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上椭住，可呈絲狀崇渗、管狀或樹枝狀等。
2.合適的溫度
一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃京郑，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞的生長宅广。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力，在低溫下些举，細胞的代謝活力及核分裂能力降低跟狱。若溫度不低于0℃，雖然細胞代謝受到影響户魏，但無損傷作用驶臊；25～35℃時，細胞以緩慢的速度生長绪抛；但若被置于40℃數(shù)小時，則不僅不利于細胞生存幢码、生長笤休，甚至可導致其死亡症副。
3.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發(fā)生褶皺、腫脹贞铣、破裂闹啦。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞的重要條件之一辕坝。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力，實際應用中酱畅，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞。
4．氣體環(huán)境與pH
細胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境纺酸，氧氣窖逗、二氧化碳是細胞生存的必要條件。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán)餐蔬，為細胞生存碎紊、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產物仗考，是細胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關痴鳄。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4缸夹。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜虽惭。
二、個人因素
1）必須身穿白大褂進入細胞培養(yǎng)間芽唇，禁止穿著易起靜電及易吸附灰塵的衣物。
2）白大褂的袖口已經(jīng)扎緊匆笤。
3）實驗開始前需確定戴的手套沒有問題，如果接觸過生物安全柜之外的物品庶诡，必須及時對手套進行消毒咆课。
三末誓、實驗過程注意
1)進入細胞培養(yǎng)間后關好門书蚪，坐下來后盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。
2)工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋殊校。需嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞呕屎，禁止把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內艺谆，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染静汤。6）確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置居凶。為了方便單手開啟瓶蓋藤抡，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松侠碧。
3)盡量不要直接傾倒溶液缠黍，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗瓷式，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（ps:不要接觸到瓶口）后在火焰上簡單燒灼贸典。
4)操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的视卢，必須及時更換廊驼。
5)細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內打開瓶口绳锅，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化鳞芙。
6)瓶蓋應當?shù)狗旁谶h離自己的地方庸队，以避免瓶蓋被誤操作所污染。
四彻消、最后一定防止細胞的交叉污染，所有器械試劑全部按區(qū)域劃分清楚宾尚，最好作上標記便于辨別。
1）按順序進行操作御板，一次只處理一種細胞牛郑，多種細胞多種操作一起進行時易發(fā)生t昆亂怠肋。2）粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口淹朋。
3）所有細胞已經(jīng)購買到貨必須及時保種凍存钉答。
（如果發(fā)生污染可重新復蘇細胞繼續(xù)培養(yǎng)）
