一臭杰、研究背景
1. 結(jié)直腸癌的流行病學和免疫治療現(xiàn)狀
結(jié)直腸癌（CRC）是最常見的癌癥之一耻警，死亡率高局前三幽纷，并且轉(zhuǎn)移性CRC的預后仍然較差疚俱。通過針對T細胞抑制分子如PD1和CTLA-4的靶向治療劝术，可以在具有微衛(wèi)星不穩(wěn)定性高（MSI-H）或DNA錯配修復缺陷（dMMR）的高突變腫瘤中誘導T細胞介導的抗腫瘤免疫，取得顯著的療效呆奕。然而僅5%的CRC患者對ICB阻斷治療敏感养晋，如何提高CRC患者的免疫反應性仍然是CRC腫瘤免疫研究的重點方向。
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2. KRAS突變是CRC發(fā)生發(fā)展的驅(qū)動因素之一梁钾，與CRC免疫細胞浸潤減少有關(guān)
研究表明匙握，約45%CRC存在KRAS突變，目前尚未有臨床上驗證有效的小分子抑制劑能通過抑制KRAS活化治療CRC陈轿。在基于基因表達的共識分子亞型（consensus molecular subtypes, CMS）分型中圈纺，與CMS1亞型CRC相比，存在KRAS突變的CMS2和CMS3亞型麦射，腫瘤微環(huán)境中免疫細胞浸潤明顯減少蛾娶。此外，KRAS突變CRC小鼠模型存在抑制性免疫微環(huán)境和對PD1抗體治療不敏感等表型潜秋，提示突變的KRAS可通過抑制抗腫瘤免疫應答促進CRC進展蛔琅。
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3. 谷氨酸通道蛋白SLC25A22在KRAS突變CRC中促進腫瘤進展
SLC25A22是線粒體轉(zhuǎn)運蛋白家族（SLC25）的成員之一，它在內(nèi)線粒體膜上促進谷氨酸的轉(zhuǎn)運進入線粒體基質(zhì)中峻呛。作者既往研究表明罗售，SLC25A22在KRAS突變型結(jié)直腸癌中起著致癌因子的作用，生成對抗氧化應激和表觀遺傳調(diào)控至關(guān)重要的代謝物钩述。但SLC25A22是否參與KRAS突變介導的抑制性免疫微環(huán)境尚不明確寨躁。
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二、擬解決的科學問題
① 研究中所使用的SLC25A22作為KRAS突變的結(jié)直腸癌免疫治療靶點牙勘。你可以提出關(guān)于SLC25A22的功能职恳、表達和調(diào)控機制的問題所禀。（既往研究已解答）
② KRAS的介導免疫抑制如何影響免疫細胞的功能？（是否上調(diào)MDSC浸潤放钦，下調(diào)CD4/8+ T細胞浸潤等色徘？）
③ SLC25A22敲除如何影響KRAS介導的免疫抑制？（SLC25A22敲除是否能夠逆轉(zhuǎn)KRAS介導的免疫抑制以及如何影響MDSC招募和細胞毒性T細胞激活操禀？）
④ 在KRAS突變結(jié)直腸癌中褂策，SLC25A22作為治療靶點是否有助于提高對ICB治療的反應？（SLC25A22 siRNA與抗-PD1聯(lián)合治療是否協(xié)同作用以及如何抑制腫瘤生長颓屑？）
三斤寂、目的和意義
本研究探討SLC25A22作為改善KRAS突變CRC患者對免疫檢查點阻斷治療反應的潛在治療靶點，有助于臨床進一步開發(fā)增強 KRAS突變CRC免疫治療反應的藥物組合邢锯，提高KRAS突變CRC的預后。
四搀别、研究內(nèi)容和結(jié)果
1. KRAS突變促進了免疫抑制（ApcMin/+KrasG12D/+Villin-Cre基因工程小鼠表型）
S1. 顯示APC-KRAS突變小鼠（ApcMin/+KrasG12D/+Villin-Cre）的中位生存期為45天丹擎，具有較高的死亡率（P < 0.0001）。
a. 顯示在45天時歇父，野生型或KRAS突變小鼠沒有腫瘤蒂培；APC突變小鼠和APC-KRAS突變小鼠的結(jié)腸中分別有1.4 ± 0.7和18.0 ± 8.4個腫瘤。
b. 顯示APC-KRAS突變小鼠結(jié)腸腫瘤中富集了多個與免疫反應相關(guān)的信號通路榜苫，包括TNF和細胞因子-細胞因子受體通路护戳。
c. 使用流式細胞術(shù)分析顯示，APC-KRAS突變腫瘤中MDSCs（CD11b+Gr1+垂睬，尤其是多核粒細胞型MDSCs）顯著增加（P < 0.01）媳荒，同時總T細胞和CD8+ T細胞受到抑制（P < 0.05）。CD4+ T細胞和巨噬細胞未受影響驹饺。
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2. SLC25A22基因敲除可以逆轉(zhuǎn)KRAS引起的免疫抑制
2.1 ApcMin/+KrasG12D/+Villin-Cre基因工程小鼠原位瘤類器官模型
2.2 鼠源性腸癌腫瘤細胞系CT26皮下種植瘤模型
2.3 ApcMin/+KrasG12D/+Slc25a22fl/fl Villin-Cre基因工程小鼠模型
d. 展示了APC-KRAS-SLC25A22 KO腫瘤與APC-KRAS突變腫瘤的生長對比钳枕，顯示APC-KRAS-SLC25A22KO腫瘤生長受阻。
e. 使用流式細胞術(shù)分析顯示赏壹，APC-KRAS-SLC25A22 KO腫瘤中的總MDSC和PMN-MDSC的含量降低（P < 0.05）鱼炒，而總T細胞（P < 0.05）和CD8+ T細胞（P < 0.05）的含量增加。
f. Slc25a22基因敲除的CT26瘤的體積較小蝌借。
g. 使用流式細胞術(shù)分析顯示昔瞧，Slc-KO CT26瘤中的MDSC（P < 0.01）和PMN-MDSC（P < 0.01）的含量降低，而總T細胞和CD8+ T細胞的含量增加（P < 0.01）菩佑。
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h. APC-KRAS-SLC25A22 KO轉(zhuǎn)基因小鼠中自晰，MDSC（Cd11b+Gr-1+）被消耗（P<0.01），并通過IF染色和IHC染色（S100a8）進行了證實稍坯；同時缀磕，CD8+T細胞被誘導（P<0.05），從而驗證了我們CT26皮下種植瘤中的觀察結(jié)果。
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2.4. SLC25A22敲除逆轉(zhuǎn)突變KRAS結(jié)腸癌細胞誘導的人源化PBMC小鼠免疫抑制作用袜蚕。
圖2b顯示糟把，SLC25A22基因敲除（SLC-KO）會導致腫瘤生長受到抑制（P < 0.001），并且減輕腫瘤重量（P < 0.01）牲剃。腫瘤浸潤的huCD45+免疫細胞的分析驗證了人源衍生的髓系抑制細胞（HLA-DR-CD11b+CD33+）的減少遣疯，同時看到CD8+ T細胞的增加（圖2c和S3）。這證實了SLC25A22對KRAS突變結(jié)腸直腸癌中人源CD45+免疫細胞浸潤的影響凿傅。
圖2d顯示缠犀，SLC25A22高表達的病例中有更多的CD33陽性細胞浸潤。在KRAS突變型CRC中聪舒，SLC25A22的表達與CD33陽性細胞呈正相關(guān)（P < 0.05）辨液，但在KRAS野生型CRC中無相關(guān)性。因此箱残，在SLC25A22高表達的KRAS突變型CRC中滔迈，MDSC水平較高（P < 0.01），而在KRAS野生型CRC中無顯著差異被辑。
圖2e顯示燎悍，使用TCGA數(shù)據(jù)構(gòu)建了一個基于MDSC的評分系統(tǒng)。在KRAS突變型CRC中盼理，MDSC高表達組SLC25A22的mRNA水平較高谈山，而在KRAS野生型CRC中無明顯差異。
圖2f, 2g通過免疫組織化學（IHC）分析臨床隊列（N = 202）中SLC25A22與CD8標記的相關(guān)性宏怔。通過比較KRAS野生型和突變型CRC奏路，發(fā)現(xiàn)KRAS突變型CRC組織中CD8低表達的比例更高，提示存在免疫抑制現(xiàn)象臊诊。值得注意的是思劳，SLC25A22高表達的CRC與SLC25A22低表達的CRC相比，CD8評分更低（P < 0.001）妨猩。整體隊列（χ2 = 13.8潜叛；P < 0.01）或KRAS突變型CRC（χ2 = 6.6；P < 0.05）中均發(fā)現(xiàn)CD8評分與SLC25A22呈負相關(guān)壶硅。綜上所述威兜，SLC25A22與KRAS突變型CRC中的免疫抑制表型相關(guān)。
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3. SLC25A22敲除抑制KRAS突變介導的CXCL1/3趨化因子通路
3.1 生信分析
3.2 轉(zhuǎn)錄水平驗證
3.3 蛋白水平驗證
3.4 細胞因子分泌水平驗證（包括細胞上清庐椒、動物模型血清）
3.5 TCGA數(shù)據(jù)庫驗證
圖3a, b, c生信分析指出cytokine-cytokine receptor interaction是SLC25A22敲除細胞顯著抑制的信號通路椒舵。
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圖3d炎癥因子qPCR芯片結(jié)果顯示APC-KRAS小鼠腫瘤組織中CXCL1、CXCL3和IL1B的表達較癌旁組織升高约谈，而DLD1和CT26細胞中SLC25A22敲除表現(xiàn)為降低笔宿。圖3e通過qPCR驗證了SLC25A22敲除后在KRAS突變結(jié)腸癌細胞（DLD1犁钟、Colo26、CT26）中下調(diào)的CXCL1/3泼橘。圖3f, g抗體蛋白芯片分析顯示在DLD1-sgControl和DLD1-SLC-KO細胞的培養(yǎng)基中分泌的細胞因子涝动，結(jié)果也提示SLC25A22敲除細胞中CXCL1和CXCL1/2/3的分泌減少。最后炬灭，圖3h通過ELISA驗證了SLC25A22敲除后DLD1醋粟、CT26和Colo26細胞中CXCL1/3的分泌下降。
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圖S5顯示重归，與APC-KRAS器官樣本相比米愿，APC-KRAS-SLC25A22KO器官樣本中的CXCL1分泌也受到抑制。為了驗證SLC25A22是否調(diào)節(jié)體內(nèi)的CXCL1/3水平鼻吮，圖3i評估了APC-KRAS器官樣本移植和CT26移植模型中的血清和腫瘤中的CXCL1/3水平育苟。在CT26移植模型中，SLC25A22基因敲除降低了血清中的CXCL1水平（P < 0.05）和腫瘤中的CXCL1水平（P < 0.001）椎木，而僅在腫瘤中下調(diào)了CXCL3水平（P < 0.01）违柏。APC-KRAS-SLC25A22KO器官樣本植入的小鼠顯示血清中CXCL1的減少，而腫瘤中的CXCL1/3水平與APC-KRAS器官樣本相比顯著降低（P < 0.001）拓哺。
圖3j使用TCGA數(shù)據(jù)庫驗證勇垛，也提示CXCL1/3是與SLC25A22 mRNA表達顯著相關(guān)的前兩個細胞因子（P < 0.0001）脖母。
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4. SLC25A22通過CXCL1-CXCR2軸調(diào)節(jié)骨髓來源抑制性免疫細胞（MDSC）的招募士鸥，并促進MDSC的活化
①體外實驗驗證SLC25A22敲低抑制MDSC趨化的作用
圖4a（方法學示意圖）：分離出的小鼠脾臟MDSC和人類PBMC移植小鼠脾臟中的人類MDSC用于趨化實驗。圖4b對比具有或不具有SLC25A22敲低CRC細胞的培養(yǎng)基谆级，對MDSC遷移的影響烤礁。結(jié)果表明，對照組細胞的培養(yǎng)基促進了MDSC的遷移肥照，而SLC25A22缺失細胞的培養(yǎng)基則減弱了這種促進作用脚仔。
②使用MDSC標志物闡明SLC25A22敲低抑制MDSC趨化的作用
圖4h比較CT26-sgControl和SLC25A22敲除的CT26腫瘤中MDSC標記物的表達水平。圖4i通過流式細胞術(shù)驗證了SLC25A22敲除對CT26腫瘤中MDSC表面PD-L1蛋白的影響舆绎。
③體內(nèi)實驗驗證SLC25A22敲除抑制MDSC趨化與CXCL1水平降低相關(guān)
3種體內(nèi)模型中腫瘤CXCL1和MDSC的相關(guān)性
④體外實驗驗證CXCL1-CXCR2軸對MDSC的趨化作用
⑤體外反向?qū)嶒?/em> 說明SLC25A22敲低抑制MDSC趨化的作用與CXCL1-CXCR2軸有關(guān)
圖4c展示了在DLD1細胞中敲除CXCL1/3后鲤脏，MDSC遷移的變化。結(jié)果表明吕朵，CXCL1-siRNA抑制了MDSC在DLD1-sgControl細胞的培養(yǎng)基中的遷移猎醇，而CXCL3-siRNA沒有影響。圖4d顯示抗CXCL1抗體是否影響MDSC遷移努溃。結(jié)果表明硫嘶，抗CXCL1抗體阻斷了CT26-sgControl和Colo26-sgControl細胞培養(yǎng)基中的MDSC遷移，但在SLC-KO細胞培養(yǎng)基中無效梧税。圖4e. 添加外源性的CXCL1促進MDSC在CT26-Slc-KO和Colo26-Slc-KO細胞培養(yǎng)基中的遷移沦疾。圖4f：顯示CXCR2抑制劑對DLD1-sgControl和CT26-sgControl細胞培養(yǎng)基中MDSC遷移的影響称近。
⑥體內(nèi)反向?qū)嶒?/em> 驗證CXCL1-CXCR2軸的作用
圖4j顯示通過給予SB265610來阻斷CXCR2是否會調(diào)節(jié)SLC25A22介導的KRAS突變型CRC的生長。圖4k：展示SB265610是否能抑制控制組中MDSC浸潤哮塞，但對SLC25A22敲除組無效刨秆，并且腫瘤中的MDSC與瘤負荷呈正相關(guān)關(guān)系。
5. SLC25A22通過促進MDSC浸潤彻桃，抑制CD8+ T細胞的抗腫瘤活性
①來自SLC25A22敲除小鼠的MDSC相比對照組坛善，對T細胞增殖的抑制能力減弱
圖5a為體外T細胞/MDSC共培養(yǎng)示意圖。圖5b比較來自SLC25A22敲除腫瘤的MDSC相比對照組在抑制CD8+ T細胞增殖方面的差異邻眷。
圖5d體內(nèi)實驗使用MDSC與CD8+ T細胞的負相關(guān)關(guān)系說明SLC25A22敲除逆轉(zhuǎn)KRAS突變腫瘤中CD8+ T細胞數(shù)量減少
②使用CD8+ T細胞的功能標記物IFN-γ眠屎、TNF-α和Granzyme B闡明SLC25A22敲除逆轉(zhuǎn)KRAS突變腫瘤中CD8+ T細胞活性降低
圖5c體外實驗
圖5e, 5f體內(nèi)實驗
③體內(nèi)反向?qū)嶒?/em> 消耗CD8+ T細胞，反向驗證了SLC25A22敲除對CD8+ T細胞驅(qū)動的抗腫瘤免疫中的功能
圖5g：展示了通過抗CD8抗體消耗CD8+ T細胞肆饶，使SLC25A22敲除對CT26異種移植物的生長抑制效應消失的結(jié)果
小結(jié)：SLC25A22通過CXCL1-CXCR2軸促進骨髓源性免疫抑制細胞趨化改衩，抑制腫瘤微環(huán)境中CD8+ T細胞數(shù)量和功能，從而參與KRAS突變免疫抑制性微環(huán)境的形成驯镊。SLC25A22調(diào)控CXCL1水平的分子機制是什么葫督？
背景：SLC25A22 (glutamate carrier 1 (GC1))是谷氨酸通道蛋白，主要將線粒體外谷氨酸轉(zhuǎn)運到線粒體內(nèi)生成α-酮戊二酸（α-KG）參與三羧酸循環(huán)板惑，與谷氨酰胺能量代謝有關(guān)橄镜。
Glutamine metabolism: from proliferating cells to cardiomyocytes, Metabolism, Volume 121, 2021
科學問題：SLC25A22調(diào)控CXCL1水平是否谷氨酰胺依賴？（是否通過谷氨酰胺代謝重編程調(diào)控CXCL1表達冯乘？）
6. SLC25A22通過調(diào)節(jié)谷氨酰胺代謝產(chǎn)生的天冬酰胺促進CXCL1生成
①KRAS突變腸癌細胞中洽胶，谷氨酰胺的增加可以促進CXCL1的分泌，而SLC25A22的缺失在高濃度谷氨酸下會導致CXCL1的mRNA水平和分泌受到抑制
圖6a使用qPCR明確谷氨酰胺濃度依賴性促進CXCL1表達裆馒，SLC25A22敲低則逆轉(zhuǎn)該現(xiàn)象姊氓；圖6b使用培養(yǎng)基上清ELISA驗證該現(xiàn)象
②使用GDH抑制劑抑制谷氨酸轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸不能降低CXCL1表達，而使用天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase）抑制劑同時抑制α-酮戊二酸和天冬氨酸生成喷好，能有效下調(diào)CXCL1表達翔横，提示KRAS突變腸癌細胞中，谷氨酰胺的增加可以促進CXCL1的分泌可能與天冬氨酸有關(guān)
GDH：谷氨酸脫氫酶（glutamate dehydrogenase 1, GLUD）梗搅，谷氨酸→α-酮戊二酸禾唁，抑制劑為R162和Purpurin
AAT：天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aminotransferase），谷氨酸-草酰乙酸→α-酮戊二酸-天冬氨酸无切，抑制劑為AOA
圖6c：
線粒體內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸的關(guān)鍵酶荡短，Glutamate metabolism and recycling at the excitatory synapse in health and neurodegeneration. Neuropharmacology. 2021 Sep 15;196:108719.
圖6d
③補充天冬酰胺可以恢復SLC25A22敲低的KRAS突變腸癌細胞的CXCL1表達和分泌
提示只有天冬氨酸可以恢復CXCL1的mRNA水平，其他代謝產(chǎn)物無法實現(xiàn)這一效果订雾；在SLC25A22敲除的細胞中肢预，外源表達SLC1A3可以增加天冬氨酸的攝取，并恢復CXCL1的表達洼哎。
④同位素標記谷氨酰胺代謝物檢測烫映，明確SLC25A22敲低下調(diào)谷氨酰胺代謝產(chǎn)生的天冬酰胺水平
圖6g
⑤補充天冬酰胺逆轉(zhuǎn)SLC25A22敲低對MDSC趨化的抑制作用
圖6h
⑥反向?qū)嶒灒禾於０泛铣擅福ˋSNS）基因沉默或天冬酰胺酶（ASNase）處理來耗竭天冬酰胺沼本，可以下調(diào)CXCL1表達和分泌，抑制MDSC趨化作用
圖6i顯示天冬酰胺合成酶（ASNS）基因沉默降低谷氨酰胺生成天冬酰胺的量, 圖6j顯示天冬酰胺酶（ASNase）消耗天冬酰胺的效果锭沟；圖6k, 6l, 6m分別為CXCL1表達抽兆、分泌和MDSC趨化實驗
小結(jié)：KRAS突變結(jié)腸癌中高表達的SLC25A22調(diào)控CXCL1水平依賴谷氨酰胺代謝產(chǎn)生的天冬酰胺濃度改變。
背景：既往研究表明KRAS突變與腫瘤代謝重編程關(guān)系密切族淮，如上調(diào)谷氨酰胺進入TCA循環(huán)辫红、絲氨酸一碳代謝途徑等，通過增強氧化磷酸化水平祝辣、甲基化水平贴妻、NADPH和GSH水平等，改善KRAS突變腫瘤細胞的能量代謝和抗氧化應激能力蝙斜，從而促進腫瘤發(fā)生發(fā)展名惩。
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科學問題：天冬酰胺濃度如何驅(qū)動CXCL1的表達？（是否通過改變相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化水平調(diào)控CXCL1表達孕荠？）
7. SLC25A22作用下增加的天冬酰胺水平通過上調(diào)SRC磷酸化促進轉(zhuǎn)錄因子ETS2活化娩鹉，驅(qū)動CXCL1表達
①天冬酰胺促進SRC磷酸化 （圖7c存在添加谷氨酰胺或天冬酰胺上調(diào)SRC總蛋白水平，且未做phos-SRC/total-SRC比值的統(tǒng)計分析稚伍，證據(jù)欠佳弯予，但同時提示了天冬酰胺上調(diào)SRC磷酸化水平可能與穩(wěn)定SRC蛋白、抑制蛋白降解有關(guān)个曙？）
圖7a使用磷酸化蛋白芯片檢測天冬氨酸處理0.5h后發(fā)生磷酸化改變的激酶锈嫩。圖7b體外驗證SLC25A22敲低抑制SRC磷酸化。圖7c添加谷氨酰胺或天冬酰胺能逆轉(zhuǎn)SLC25A22敲低對SRC磷酸化的抑制作用
②天冬酰胺可能通過結(jié)合的方式增強SRC蛋白穩(wěn)定性困檩，并上調(diào)SRC激酶活性
圖7d顯示天冬氨酸增加了重組SRC的熱穩(wěn)定性祠挫，圖7e顯示天冬氨酸與SRC可以通過結(jié)合親和力（Kd）為21 μM而發(fā)生相互作用那槽。此外悼沿，圖7f顯示天冬氨酸誘導了重組SRC蛋白的磷酸化和激酶活性。相比之下骚灸，圖S12顯示D-天冬酰胺無法與SRC結(jié)合或激活糟趾。
③明確天冬酰胺依賴的SRC磷酸化上調(diào)通過促進轉(zhuǎn)錄因子ETS2活化，驅(qū)動CXCL1表達
④闡明ETS2與CXCL1啟動子結(jié)合甚牲，促進CXCL1轉(zhuǎn)錄
圖7g通過對CXCL1啟動子預測分析义郑、受SRC調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)集和SLC25A22敲低的RNA seq結(jié)果取交集，發(fā)現(xiàn)ETS2是一個潛在的轉(zhuǎn)錄因子丈钙，能將SLC25A22與CXCL1連接起來非驮。圖7h在DLD1和CT26細胞中驗證SLC25A22的基因沉默抑制了ETS2和p-ETS2（活性形式）水平。圖7i在DLD1和CT26細胞中發(fā)現(xiàn)SLC25A22的基因沉默抑制了ETS2的核轉(zhuǎn)位雏赦。圖7j使用谷氨酰胺或天冬酰胺均能逆轉(zhuǎn)SLC25A22沉默的作用劫笙，上調(diào)ETS2蛋白水平芙扎。圖7k使用siRNA沉默天冬酰胺合成酶（ASNS）表達，反向驗證了ETS2對天冬酰胺水平的響應填大。圖7l通過敲低ETS2表達反向驗證ETS2驅(qū)動CXCL1表達戒洼。圖7m過表達ETS2正向驗證ETS2上調(diào)CXCL1表達。圖7n使用ChIP-PCR和Southern Blot明確ETS2與CXCL1啟動子多個motif結(jié)合允华。圖7o通過熒光素酶報告基因試驗確定ETS2可激活CXCL1啟動子圈浇。圖7使用pSRC抑制劑能下調(diào)DLD1細胞中p-ETS2、ETS2和CXCL1蛋白水平靴寂，證明SRC作為天冬酰胺感受器在SLC25A22下游調(diào)控ETS2/CXCL1軸磷蜀。
8. SLC25A22敲除使KRAS突變型結(jié)直腸癌對免疫檢查點抑制療法更敏感
圖8分別在CT26-KrasG1D和MC38-KrasG12V異種移植瘤模型驗證SLC25A22敲除協(xié)同PD1單抗對腫瘤的抑制效果，圖8c和圖8d的流式細胞術(shù)結(jié)果顯示百炬，SLC25A22敲除加上抗PD1療法協(xié)同作用降低了髓系-抑制細胞（MDSC）的數(shù)量蠕搜，并促進細胞毒性CD8+ T細胞的浸潤和IFN-γ的表達。
圖8e使用siSLC25A22納米顆粒（VNP）與抗PD1的聯(lián)合治療協(xié)同抑制髓系-抑制細胞（MDSC）的數(shù)量收壕，并促進細胞毒性CD8+ T細胞的浸潤和IFN-γ的表達妓灌，從而抑制MC38-Kras G12V 種植瘤的生長。
五蜜宪、總結(jié)
1. KRAS突變是CRC的驅(qū)動因素虫埂，并且與免疫浸潤的減少有關(guān)。
2. 靶向SLC25A22（siRNA納米顆粒沉默表達）通過減少天冬酰胺生成圃验，下調(diào)SRC-ERT2軸活性掉伏，抑制CXCL1表達，從而減少髓系來源抑制細胞（MDSC）并增加CD8+ T細胞澳窑，聯(lián)合PD1抗體可有效抑制KRAS突變CRC進展斧散。
總結(jié)圖
六、優(yōu)缺點
- 臨床意義：SLC25A22作為潛在的治療靶點，用于改善KRAS突變CRC患者對免疫檢查點阻斷治療的反應徙硅。（KRAS突變作為CRC的驅(qū)動因素嗅绸，并與降低的免疫浸潤相關(guān)聯(lián)。其次箍镜，針對PD1和CTLA-4等T細胞抑制分子的靶向治療在具有高突變腫瘤的CRC患者的小部分人中顯示出療效，凸顯了改善CRC對免疫檢查點阻斷治療反應的需求煎源。）
- 可參考方法學：構(gòu)建人源化PBMC腫瘤免疫細胞浸潤模型色迂、使用類器官構(gòu)建同種移植瘤模型（有利于使用基因工程鼠進行體外實驗）、脾臟免疫細胞分離培養(yǎng)及趨化實驗等
- 前言可參考：相關(guān)KRAS突變與抑制性免疫微環(huán)境關(guān)系的說法和文獻來源（見匯報的背景部分）
- 瑕疵：①圖8的siRNA納米顆粒應為VNP手销，圖內(nèi)標為LNP歇僧。②對于為什么研究MDSC，為什么使用磷酸化蛋白芯片等沒有進行討論分析锋拖。③缺乏臨床證據(jù)：如關(guān)于SLC25A22在結(jié)直腸癌患者組織芯片驗證和抑制性免疫微環(huán)境的相關(guān)性分析诈悍。
