實(shí)驗(yàn)步驟
1.研磨充分一定量的植物組織募舟,加入500ul 2xCTAB(含0.2%的β-巰基乙醇)徘溢,混勻。
2.65℃水浴砂轻,45min奔誓,期間顛倒數(shù)次。
3.加入Tris飽和酚/氯仿(1:1)搔涝,顛倒混勻5min厨喂;12000rpm 離心10min
4.取上清(約500ul)于新的離心管中,加入等體積的氯仿/異戊醇(24:1)庄呈,充分混勻蜕煌。
5.12000rpm,10min诬留;取上清斜纪,加入1ml -20℃預(yù)冷的無(wú)水乙醇,置于-20℃文兑,30-40min盒刚。
6.12000rpm,10min绿贞;棄上清因块,加入500ul ddH2O 溶解沉淀。
7.加入120ul 濃度為100ug/ml 的RNase籍铁,使終濃度為20ug/ml涡上,混勻,室溫放置10min寨辩。
8.將上述DNA溶液加入到純化柱子吓懈,靜置5分鐘,12000rpm離心靡狞,2min耻警,收集溶液。
9.向離心后的液體中甸怕,加入25ul 3M NaAC(pH5.2)和525ul 異丙醇甘穿,混勻室溫放置5min。
10.12000rpm梢杭,8min温兼,棄上清,用70%乙醇洗滌兩遍沉淀武契。
11.去除干凈多余的乙醇募判,用100ul ddH2O溶解荡含。
12.置于-20℃,保存届垫。
試劑
2xCTAB提取液(含0.2%的β-巰基乙醇):CTAB-2g释液;NaCl-8.18g;EDTA0.74g ; 1M Tris-HCl 10ml(pH8.0)装处;200ul β-巰基乙醇误债。
3M 醋酸鈉:40.8g 三水醋酸鈉,加入40ml ddH2O 溶解妄迁,用冰醋酸調(diào)到pH5.2寝蹈,最后定容到100ml。