人前列腺癌細(xì)胞(Lncap)培養(yǎng)注意要點(diǎn)

LNCaP克隆FGC是由JS Horoszewicz等人于1977年從一名50歲的白人男性(血型B +)的左鎖骨上淋巴結(jié)的穿刺活檢中分離出來的糜烹,該確診為轉(zhuǎn)移性前列腺癌没宾。

該細(xì)胞不形成均一的單層而是成簇生長(zhǎng)码秉,所以傳代的時(shí)候要反復(fù)吹打形成單個(gè)細(xì)胞塌西;該細(xì)胞貼壁不牢蛙紫,達(dá)不到匯合狀態(tài)皂股,而且會(huì)使培養(yǎng)基迅速變酸劈猪;傳代后48h內(nèi)不要擾動(dòng)昧甘,一定要保持培養(yǎng)瓶靜止。如果此時(shí)挪動(dòng)培養(yǎng)瓶战得,會(huì)使大部分細(xì)胞從瓶底脫落充边。如果出現(xiàn)此種情況,需要重新孵育24~48h使細(xì)胞重新貼壁常侦,細(xì)胞貼壁后可更換培養(yǎng)基示启。

細(xì)胞名稱:人前列腺癌細(xì)胞(STR鑒定正確)

細(xì)胞簡(jiǎn)稱:Lncap

產(chǎn)品貨號(hào):TCH-C238

種屬來源:

組織來源:前列腺

疾病特征:前列腺癌

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系:RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號(hào):TCH-G238

傳代比例:1:2-1:3多搀,每2-3天換液一次

傳代周期:72-96 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO2蟆盐,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO啄踊,液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè):細(xì)菌、真菌杀捻、支原體檢測(cè)均為陰性

Lncap細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 該細(xì)胞并不形成一致的單層井厌,而是形成集落

2. 該細(xì)胞會(huì)使培養(yǎng)基快速變酸,且生長(zhǎng)緩慢致讥,故傳代后 48 小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)

3. 傳代后細(xì)胞貼壁較慢仅仆,48h 內(nèi)不要擾動(dòng)

4.?細(xì)胞貼壁性不強(qiáng),普通 TC 處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細(xì)胞很好的貼壁垢袱,培養(yǎng)難度較高墓拜。?建議使用 Corning 的 cellbind 細(xì)胞培養(yǎng)瓶,或者使用多聚-L-賴氨酸溶液對(duì)培養(yǎng)底面包被后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)

5.?常溫運(yùn)輸途中请契,多數(shù)細(xì)胞會(huì)從培養(yǎng)瓶底分離咳榜,懸浮在培養(yǎng)基中夏醉,請(qǐng)收集懸浮細(xì)胞離心 后重新接種。

6. 收貨后涌韩,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漂浮或成團(tuán)畔柔,可按下面的步驟進(jìn)行處理:

(1)將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的所有培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)入無菌離心管臣樱,離心收集細(xì)胞(1200rpm 3min)靶擦;

(2)去掉上清,用PBS重懸細(xì)胞雇毫,將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中玄捕,PBS震動(dòng)離心管混勻即可,再次離心(1200rpm 3min)棚放;

(3)去掉上清枚粘,加入1ml左右0.25%胰酶,重懸混勻細(xì)胞飘蚯。震動(dòng)離心管赌结,混勻即可,不能吹打孝冒。放入培養(yǎng)箱,消化細(xì)胞拟杉,消化時(shí)間3分鐘左右庄涡;

(4)消化完畢后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液搬设,使細(xì)胞團(tuán)分散穴店。加入5ml含血清的培養(yǎng)基,混勻后終止消化拿穴,離心(1200rpm 3min)泣洞;

(5)去掉上清,加入5-7ml相應(yīng)完全培養(yǎng)基混勻默色,輕輕/反復(fù)吹打細(xì)胞球凰,接種于無菌T25瓶中(接種容器應(yīng)提前用對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基浸潤(rùn))。

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