什么是ROS1基因融合
基因融合是指一個基因在某一點上異常斷裂鲫构，與另一個基因融合伦忠，形成一個由兩個原本相距遙遠的基因組成的雜交基因滤蝠。基因融合也被稱為基因重排嘱巾，即基因在染色體上的排列順序發(fā)生變化憨琳。這些融合或重排可能是幾個異常遺傳事件的結(jié)果，如缺失旬昭、重復篙螟、反轉(zhuǎn)或易位。異常融合的基因可以導致癌癥的發(fā)生并促進其生長问拘，因為這些融合事件可能會將兩個獨立時可能不致癌的基因并列遍略，但融合后可以刺激彼此的活性，從而導致細胞活動的異常场梆，甚至致癌墅冷。
ROS1基因融合是染色體內(nèi)（同一染色體斷裂和異常重新連接）異常重排或染色體間（不同染色體斷裂和異常重新連接）異常重排的結(jié)果纯路，導致ROS1基因與多種伙伴基因并列或油。
當這些基因中的一個被破壞、變異或重新排列時驰唬，它們就會編碼出異常蛋白質(zhì)顶岸，這種蛋白質(zhì)隨后會執(zhí)行異常功能，例如驅(qū)動癌變的發(fā)生發(fā)展叫编。ROS1基因融合是致癌的辖佣，并且在多種癌癥中都有發(fā)現(xiàn)：最早于1987年在膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）中發(fā)現(xiàn)，然后2007年在非小細胞肺癌（NSCLC）中發(fā)現(xiàn)搓逾，其他癌癥包括膽管癌卷谈、卵巢癌、胃癌霞篡、結(jié)直腸癌等世蔗。
ROS1融合基因檢測要點
近年來，隨著肺癌分子生物學機制研究的不斷深入和靶向治療的發(fā)展朗兵，已有10余種驅(qū)動基因在肺癌中被發(fā)現(xiàn)污淋，除了EGFR、ALK等人們熟知的基因突變余掖，ROS1這一罕見驅(qū)動基因也逐漸走入人們的視線寸爆。ROS1變異主要為ROS1基因與其他基因發(fā)生斷裂融合，多發(fā)生在NSCLC（非小細胞肺癌），陽性率約為1%-2%[1]赁豆。ROS1融合陽性NSCLC年齡偏薪龃肌（中位年齡49.8歲），多為女性魔种、從未吸煙/輕吸煙者患者着憨，且主要發(fā)生的組織類型為腺癌。成功檢測出ROS1融合基因是合理治療的關鍵务嫡，也是對其進行個體化治療的前提甲抖。
目前針對ROS1融合基因的常用方法有4種：
熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）心铃、免疫組織化學法（immunohistochemistry准谚，IHC）、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（reverse transcription- poly merase chain reaction去扣，RT-PCR）及二代測序技術（next-generation sequencing柱衔，NGS），且在臨床實踐中各有優(yōu)劣愉棱。
1. 熒光原位雜交FISH
FISH是目前檢測腫瘤組織中染色體重排最有效的診斷技術之一唆铐，不僅可以檢測已知的融合突變，也可以檢測未知的融合突變奔滑，而且結(jié)果具有可靠性及穩(wěn)定性艾岂，也是目前檢驗其他檢測技術準確性的最重要的手段。
ROS1融合基因檢測采用分離探針試劑設計朋其。ROS1分離探針包括兩部分王浴，一部分識別分離點5’?端（端粒）附近點基因序列，另一部分識別融合分離點3’?端（著絲粒）附近點基因序列梅猿。３′端探針通常 被標記成綠色氓辣，５′端探針標記為橘紅色或紅色。當樣本中≥15％細胞出現(xiàn)分離信號形態(tài)（紅色和綠色信號分離）或者單一3’信號形態(tài)（單獨綠色信號）診斷為ROS1基因融合陽性袱蚓。但因檢測成本較高钞啸、需要專業(yè)設備及人員、試劑昂貴喇潘、熒光信號消減迅速等缺點体斩，限制了該法的廣泛應用。
2. RT-PCR
RT-PCR檢測具有靈敏性高响蓉、特異性強硕勿、簡便快速的特點，在實驗室中應用更為廣泛枫甲，可檢測所有融合型但不能區(qū)分融合類型源武。
目前扼褪，對于ROS1 PCR檢測多數(shù)采用real-time RT-PCR技術。real-time RT-PCR技術是RNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA和熒光定量PCR擴增相結(jié)合的一種技術粱栖，首先經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶和特異性引物作用下话浇，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板擴增目的片段闹究。該技術在PCR反應體系中加入熒光基團幔崖，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過Ct值對未知模板進行定性和定量分析直接檢測基因融合狀態(tài)的一種方法渣淤。
目前赏寇，國家食品藥品監(jiān)督管理局（NMPA）已經(jīng)批準多個ROS1陽性NSCLC的real-time RT-PCR診斷試劑盒。
3.IHC
IHC可作為常規(guī)ROS1融合基因的篩選手段价认。與FISH技術相比嗅定，IHC成本低，快速準確用踩，臨床應用更為廣泛渠退。IHC檢測通過顯色劑標記抗體，利用免疫反應的特異性來確定抗原脐彩。
在NSCLC患者中碎乃，目前可用于ROS1融合基因篩選的抗體主要為D4D6（Cell Signaling Tech公司），檢測ROS1融合蛋白的靈敏度和特異度分別達到了100％和 85％-100％惠奸。因為使用IHC進行ROS1檢測梅誓，操作方法、判讀標準也不統(tǒng)一晨川，導致各檢測中心的檢測結(jié)果存在較大的波動性证九。
我國《ROS1陽性非小細胞肺癌診斷病理專家共識》評判標準如下：
IHC 3+: &10%的腫瘤細胞呈現(xiàn)深棕色強著色删豺；
IHC 2+：&10%的腫瘤細胞呈現(xiàn)棕色著色共虑；
IHC 1+: &10%的腫瘤細胞呈現(xiàn)微弱棕色著色，且無任何背景染色呀页；
IHC 0：腫瘤細胞無明顯著色或≤10％微弱棕色著色妈拌。
IHC檢測的強陽性與RT-PCR/FISH檢測陽性之間存在高度的一致性，但中度陽性及弱陽性與RT-PCR/FISH檢測陽性之間一致性較差蓬蝶。對于IHC 1+以上的患者尘分，建議使用RT-PCR/FISH進行ROS1融合基因的確診。
深棕色強著色（IHC 3+)丸氛，且ROS1 FISH檢測也確診為陽性（紅色和綠色信號分離）
4.NGS
NGS又稱高通量測序培愁，廣泛應用于醫(yī)學領域中腫瘤的預防、檢測及治療缓窜，能夠準確檢測已知的基因及其他基因的突變定续。
NGS分為基于DNA的NGS或基于RNA的NGS和基因擴增的NGS與雜交捕獲的NGS谍咆，操作流程復雜，包含雜交捕獲私股、建庫摹察、測序、數(shù)據(jù)分析倡鲸、變異注釋等流程供嚎。
NGS對于操作人員及操作環(huán)境的要求高，檢測周期長（針對涵蓋基因數(shù)量不同的檢測panel峭状，需3 d-10 d出報告）克滴，但NGS檢測技術具有其不可替代的優(yōu)勢：一個平臺一份樣本即可得到多個基因檢測結(jié)果，而需要多個技術平臺优床，多份樣本偿曙；NGS能檢測未知基因變異，而傳統(tǒng)檢測技術未能檢測未知融合羔巢。相比傳統(tǒng)基因檢測方法望忆，NGS檢測有明顯的技術優(yōu)勢。但傳統(tǒng)基因檢測方法因臨床可及性高和單次檢測成本較低而在臨床應用廣泛竿秆。
NGS流程—分子診斷檢測流程長启摄，缺乏規(guī)范，每個步驟極易引入變量
總結(jié)：在臨床實踐中幽钢，怎樣有效規(guī)范地應用現(xiàn)有的檢測體系歉备，最大化地篩選出ROS1陽性的患者，是ROS1陽性患者獲得靶向藥物治療的關鍵匪燕。
海星生物ROS1融合基因標準現(xiàn)貨
