對(duì)于經(jīng)常做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究者來(lái)說(shuō)，能否從生物材料中獲得符合質(zhì)量要求的DNA，直接關(guān)系到下游實(shí)驗(yàn)的成敗傻昙。在眾多的生物材料中篓叶，各種動(dòng)物組織是我們經(jīng)常研究的顺囊，它對(duì)于很多生命機(jī)...
發(fā)簡(jiǎn)信
IP屬地：江蘇
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磁珠法組織DNA提取試劑的選擇
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磁珠法血液DNA提取試劑的選擇
隨著大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)樣本量的增多民傻，如何高效快速地進(jìn)行核酸檢測(cè)成為研究者關(guān)注的重點(diǎn)想幻。目前呀舔，醫(yī)療機(jī)構(gòu)以及檢測(cè)機(jī)構(gòu)幾乎都會(huì)首選血液樣本作為檢測(cè)標(biāo)本弥虐。血液DNA提取方法主要有...
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細(xì)胞DNA提取試劑的選擇從細(xì)胞或組織中提取核酸進(jìn)行分子生物學(xué)研究或基因檢測(cè)已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷以及科學(xué)研究的一種重要手段。原理不必多說(shuō)别威，做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都知道躯舔，那就是將細(xì)胞膜破裂，變性膜蛋...
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糞便DNA提取試劑的選擇
隨著腸道菌群宏基因組研究的興起省古，研究者通過(guò)提取腸道全部微生物基因組DNA粥庄，構(gòu)建宏基因組文庫(kù)，對(duì)菌群多樣性和功能活性豺妓、種群結(jié)構(gòu)惜互、協(xié)作關(guān)系、與腸道間關(guān)系琳拭、進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行研究训堆，可以...
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拭子RNA提取試劑的選擇
目前，主流的RNA提取方法有Trizol法白嘁、離心柱法和磁珠法坑鱼。其中，Trizol法與離心柱法相比絮缅，提取效果相當(dāng)鲁沥，但因其對(duì)操作者帶來(lái)的毒性，現(xiàn)在越來(lái)越被棄用耕魄。磁珠法可以針對(duì)大...
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苯酚作為蛋白變性劑,同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí),由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶画恰。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相吸奴。離心分層后取出水層允扇，多次重復(fù)操作缠局，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)考润，用乙醇沉淀DNA 狭园。此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)额划，取出妙啃。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .但缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)費(fèi)力，苯酚和氯仿還有一定毒性俊戳，我見(jiàn)過(guò)的實(shí)驗(yàn)室很少有用這種方法的。試劑盒經(jīng)典的是離心柱(BIODAI)就是把硅膠膜固定在離心管中馆匿，類似于超濾膜抑胎，用離心力或者負(fù)壓讓液體通過(guò)硅膠膜，核酸就留在膜上渐北。在經(jīng)過(guò)洗滌阿逃、洗脫的步驟得到核酸。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單赃蛛、時(shí)間短恃锉，現(xiàn)在也能達(dá)到很高的質(zhì)量
核酸提取經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
一、核酸 核苷酸單體聚合而成的生物大分子呕臂，是生物細(xì)胞最基本和最重要的成分破托。一般認(rèn)為，生物進(jìn)化即始于核酸歧蒋，因?yàn)樵谒猩镔|(zhì)中只有核酸能夠自我復(fù)制土砂。今天已知核酸是生物遺傳信息的...
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37℃15min是一個(gè)逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程，而85℃5s是滅活逆轉(zhuǎn)錄酶谜洽，我們實(shí)驗(yàn)用的BIODAI逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)修要50℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)45分鐘萝映，再85℃?5分鐘滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，如果需要獲取的目標(biāo)cDNA長(zhǎng)度大于5kb阐虚，逆轉(zhuǎn)錄時(shí)間就需要相應(yīng)延長(zhǎng)到60分鐘序臂。
普通PCR、原位PCR实束、反向PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR的 基本原理和操作步驟（三）
反向PCR 普通PCR奥秆、原位PCR、反向PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR的 基本原理和操作步驟（三） 反向PCR(reverse PCR)是用反向的互補(bǔ)引物來(lái)擴(kuò)增兩引物以外的未知序列的片...
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逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的揭示是分子生物學(xué)研究中的重大發(fā)現(xiàn)磕洪，是對(duì)中心法則的重要修正和補(bǔ)充吭练。人們通過(guò)體外模擬該過(guò)程，以樣本中提取的mRNA為模板析显，我們實(shí)驗(yàn)室用的BIOG Super Reverse Transcriptase效果尤為明顯鲫咽，在逆轉(zhuǎn)錄酶（BIOG Super Reverse Transcriptase）的作用下签赃，合成出互補(bǔ)的cDNA，構(gòu)建cDNA文庫(kù)分尸，并從中篩選特異的目的基因锦聊。該方法已成為基因工程技術(shù)中最常用的獲得目的基因的策略之一。
反轉(zhuǎn)錄
rtPCR的關(guān)鍵步驟： ?反轉(zhuǎn)錄：將RNA反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA模板 ?變性：讓cDNA充分打開(kāi) ?退火：讓引物能結(jié)合到模板DNA上 ?延伸：讓 DNA 聚合酶（Taq 酶）開(kāi)...
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MicroRNA確實(shí)不易提取箩绍，不過(guò)最近我們實(shí)驗(yàn)室新購(gòu)入了一款biog提取游離RNA的試劑盒孔庭，提取純度比較高，而且操作簡(jiǎn)單快捷材蛛，只要半個(gè)小時(shí)圆到。
microRNA調(diào)控m6A RNA甲基化文獻(xiàn)解讀
m6A RNA Methylation Is Regulated by MicroRNAsandPromotes Reprogramming to Pluripotency ...
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DNA降解無(wú)非兩個(gè)原因：
1.細(xì)胞內(nèi)DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前沒(méi)有在細(xì)胞破碎的情況下放久吧卑吭？
2.機(jī)械力作用：有很劇烈的長(zhǎng)時(shí)間渦旋嗎芽淡？或者之類的。但一般也不會(huì)有事豆赏。
我們實(shí)驗(yàn)室一般使用BIOG DNA Blood Isolate Kit提取全血樣本中的DNA,然后Qubit測(cè)提取到的DNA濃度CTAB法--DNA提取
實(shí)驗(yàn)步驟 1.稱取0.1g左右的植物組織挣菲，放入2ml離心管，加入600ul的DNA提取緩沖液（Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3）掷邦。2.研磨徹底...
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聽(tīng)我?guī)熃阏f(shuō)他們用BIOG CFDNA EASY KIT離心技術(shù)提取樣本血清中的microRNA,然后用Qubit 測(cè)濃度,我認(rèn)為樓主如果覺(jué)得提取到的microRN濃度不高可以用3倍體積的無(wú)水乙醇白胀、0.1體積的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀進(jìn)行濃縮,或者可以用真空濃縮儀進(jìn)行濃縮
microRNA與血管通透性轉(zhuǎn)移研究套路
Cancer-secretedmiR-105destroysvascularendothelialbarrierstopromotemetastasis，if=27.407C...