本科畢業(yè)于浙江大學(xué)，碩士畢業(yè)于復(fù)旦大學(xué)十兢，浙大讀博ing趣竣。<br>如果沒(méi)有及時(shí)回復(fù)可以發(fā)送郵件：jlyq617@gmail.com
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NGS012 轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)及ATAC-seq轉(zhuǎn)座因子 Transposon 一段DNA順序可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來(lái)摇庙，環(huán)化后插入另一位點(diǎn)，并對(duì)其后的基因起調(diào)控作用遥缕，此過(guò)程稱轉(zhuǎn)座卫袒。這段序列稱跳躍基因或轉(zhuǎn)座子。轉(zhuǎn)座子是...
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人丑就要多讀書呀
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PyMOL學(xué)習(xí)筆記
PyMOL是一款生物大分子三維結(jié)構(gòu)顯示軟件，其中“Py”是指此軟件使用Python語(yǔ)言編寫户秤，“MOL”是指Molecule码秉。 PyMOL官網(wǎng)是http://www.PyMOL...
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生物信息學(xué)的學(xué)習(xí)筆記
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蛋白質(zhì)經(jīng)泛素-蛋白酶體降解研究基本思路（圖文詳解）泛素和泛素化介紹 泛素 泛素為含76個(gè)氨基酸莉兰、大小約為8.6 kDa的小蛋白質(zhì)挑围，在真核生物中普遍存在且高度保守。人類基因組中的四個(gè)基因編碼泛素：UBB糖荒，UBC杉辙，UBA52和R...
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@凍春卷 也謝謝你的系列推文(●'?'●)
CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除捶朵，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)蜘矢，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同综看，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@凍春卷 從去年年底看你的推文開(kāi)始學(xué)習(xí)品腹，現(xiàn)在終于拿到KO細(xì)胞系了，非常感謝你這個(gè)系列推文對(duì)我的幫助红碑！
分享下我個(gè)人挑單克隆過(guò)程：96孔板內(nèi)轉(zhuǎn)移到24孔板（大概2天長(zhǎng)滿）舞吭，再取24孔板的一半提DNA或者蛋白，更少細(xì)胞量沒(méi)有嘗試析珊。測(cè)序結(jié)果區(qū)分多克隆和單克隆雜合子：前者峰形雜亂無(wú)規(guī)則羡鸥，后者套峰規(guī)則且比例固定，也可以連T載體確定一下忠寻。CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后惧浴，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)奕剃，最終還是要看測(cè)序結(jié)果衷旅。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同捐腿，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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明白了 謝謝春卷老師(●'?'●)
CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除芜茵，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)叙量，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同九串，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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春卷老師好绞佩，關(guān)于單克隆鑒定，有幾點(diǎn)想請(qǐng)教：
1.96孔板內(nèi)的細(xì)胞是否不夠提DNA猪钮？
2.96孔板內(nèi)細(xì)胞擴(kuò)出來(lái)推薦是用24孔板 or 12孔板 or 6孔板品山？
3.對(duì)于測(cè)序套峰的是否無(wú)法區(qū)別是單克隆雜合子還是多個(gè)克隆長(zhǎng)成的？
4.一直沒(méi)有太理解為什么連接T載體可以進(jìn)一步鑒定??
謝謝春卷老師烤低，感激不盡~~CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后肘交，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)扑馁，最終還是要看測(cè)序結(jié)果涯呻。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@74640e63c49c 我也正在挑單克隆 確實(shí)單個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)出來(lái)的孔就不多... 還要再驗(yàn)證工作量也很大... 共勉 ??
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)腻要，我只說(shuō)一次复罐，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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@凍春卷 嗯嗯明白了 謝謝春卷老師~ 后面也想做library的screening 希望能多多交流??
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次雄家，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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@74640e63c49c 您好 不知道你是否這樣做了 想請(qǐng)教下把同一基因不同靶點(diǎn)做成pool包病毒后去感染目的細(xì)胞效诅，是否可能一個(gè)目的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)了多個(gè)病毒(包含多個(gè)靶點(diǎn)的sgRNA)，然后該基因同時(shí)發(fā)生多個(gè)靶點(diǎn)的NHEJ趟济，這樣KO效率是否會(huì)高于感染單一病毒乱投？
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次顷编，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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還有很多其他的設(shè)計(jì)sgRNA的網(wǎng)站戚炫，比如CHOPCHOP & CCTop 可以去這些里面看看，還有一些更偏門的軟件設(shè)計(jì)勾效，總之不止zhang lab的這個(gè)設(shè)計(jì)工具的嘹悼。
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次层宫，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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@凍春卷 好的好的 非常感謝您~ 這個(gè)系列是我新手上路最大的救星 我繼續(xù)把后面的看完可能有些問(wèn)題就解開(kāi)了。真的非常感謝這個(gè)系列的文章???????峦筒。
CRISPR-Cas9基因編輯2--gRNA設(shè)計(jì)（下）
簡(jiǎn)介和前期文章 我對(duì)之前的所有教程進(jìn)行了再次詳細(xì)的總結(jié)CRISPR-Cas9基因編輯之背景介紹及gRNA設(shè)計(jì)（上） 前言： 在上一次文章中究西，我們已經(jīng)得到了在線工具設(shè)計(jì)的sgR...
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春卷老師好，我的目的細(xì)胞不是293T物喷，我在確定質(zhì)粒構(gòu)建好了后卤材，能夠直接轉(zhuǎn)我的目的細(xì)胞，就省區(qū)轉(zhuǎn)293T這一步峦失？新手上路扇丛，非常感謝~
CRISPR-Cas9基因編輯4--確定Cas9質(zhì)粒構(gòu)建成功+漂亮的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
簡(jiǎn)介和前期文章 我對(duì)之前的所有教程進(jìn)行了再次詳細(xì)的總結(jié)CRISPR-Cas9基因編輯之背景介紹及gRNA設(shè)計(jì)（上）[http://www.reibang.com/p/e5c...
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春卷老師好，最后一part設(shè)計(jì)檢測(cè)所需引物尉辑，是在CRISPR/cas9載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后提取細(xì)胞基因組DNA后做PCR的引物嗎帆精？以及這PCR的目的是什么呢？擴(kuò)增成長(zhǎng)片段后送去測(cè)序嗎隧魄？
新手上路卓练，不勝感激~~CRISPR-Cas9基因編輯2--gRNA設(shè)計(jì)（下）
簡(jiǎn)介和前期文章 我對(duì)之前的所有教程進(jìn)行了再次詳細(xì)的總結(jié)CRISPR-Cas9基因編輯之背景介紹及gRNA設(shè)計(jì)（上） 前言： 在上一次文章中，我們已經(jīng)得到了在線工具設(shè)計(jì)的sgR...
