上次我們講解了怎么通過IHC score值對免疫組化進(jìn)行分析，但是也有的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)IHC score并不適用于所有的免疫組化片子批狱，陽性表達(dá)較少的情況下眶根，IHC Profiler可能會判定為陰性霜威，這就導(dǎo)致我們無法擁有一個較好的表征數(shù)值。那在這種情況下卜高，我們可以通過測定免疫組化片子陽性信號的平均光密度值來進(jìn)行表征，目前該方法也被多數(shù)高分文章所采用認(rèn)可[1-4]南片。
1.什么是平均光密度
累積光密度（IOD）掺涛，就是把圖片上每個棕色點的光密度值全部累加起來得到的值。
平均光密度（Mean density）就是用IOD除以有效目標(biāo)分布區(qū)域的面積（Area）所得到的值疼进。
即平均光密度=IOD值/Area值
免疫組化照片主要是比較組別間（e.g.癌和癌旁薪缆、用藥前和用藥后）平均光密度的大小。
2.實操展示
計算平均光密度最常用的圖像分析軟件：Image-Pro Plus（術(shù)業(yè)有專攻伞广，下載問度娘哈）拣帽。
（1）首先，我們在軟件里打開一張免疫組化照片嚼锄。
（2）選擇下圖按鈕减拭，選擇“Measure” →Select Measurements →選擇“Area”、“Density（mean）”区丑、“IOD”?→OK峡谊。
（3）選擇“Select Color”，點擊取色器（下圖紅框）選擇目標(biāo)區(qū)域（陽性表達(dá)量比較高的區(qū)域）刊苍，如果選錯或效果不好既们，點擊撤回（下圖綠框），也可以點擊擦除器（下圖藍(lán)框）進(jìn)行局部擦除正什。
（4）閱覽全片啥纸，檢查陽性表達(dá)區(qū)域是否已經(jīng)圈選完畢。之后選擇右下角的“Close”關(guān)閉頁面婴氮。再選擇“Count”進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計（注意這步一定不能忘記斯棒，否則后面無數(shù)據(jù)）。
（5）選擇導(dǎo)航欄的“Measure”→“Data Collector”主经，在“Layout”種選擇參數(shù)荣暮，分別是“Image 的Name”、“count/size的Area（Mean）”罩驻、“count/size的Density（Mean）”穗酥、“count/size的IOD（Mean）”，確認(rèn)無誤后點擊“Collect Now”，在Date list中查看數(shù)據(jù)砾跃。
（6）通過“Data Collector”的“Export”可以導(dǎo)出txt格式的數(shù)據(jù)骏啰。
（7）計算平均光密度值。
該圖片的平均光密度=5606.87/53.03 = 105.73
參考文獻(xiàn)
[1]? Ma DN, Chai ZT, Zhu XD, Zhang N, Zhan DH, Ye BG, Wang CH, Qin CD, Zhao YM, Zhu WP, Cao MQ, Gao DM, Sun HC, Tang ZY. MicroRNA-26a suppresses epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma by repressing enhancer of zeste homolog 2. J Hematol Oncol. 2016 Jan 6;9:1. doi: 10.1186/s13045-015-0229-y .
[2]? Zhang L, Niu H, Ma J, Yuan BY, Chen YH, Zhuang Y, Chen GW, Zeng ZC, Xiang ZL. The molecular mechanism of LncRNA34a-mediated regulation of bone metastasis in hepatocellular carcinoma. Mol Cancer. 2019 Jul 26;18(1):120. doi: 10.1186/s12943-019-1044-9 .
[3]? Liu W, Zhou L, Zhou C, Zhang S, Jing J, Xie L, Sun N, Duan X, Jing W, Liang X, Zhao H, Ye L, Chen Q, Yuan Q. GDF11 decreases bone mass by stimulating osteoclastogenesis and inhibiting osteoblast differentiation. Nat Commun. 2016 Sep 22;7:12794. doi: 10.1038/ncomms12794 .
[4]? Cao MQ, You AB, Zhu XD, Zhang W, Zhang YY, Zhang SZ, Zhang KW, Cai H, Shi WK, Li XL, Li KS, Gao DM, Ma DN, Ye BG, Wang CH, Qin CD, Sun HC, Zhang T, Tang ZY. miR-182-5p promotes hepatocellular carcinoma progression by repressing FOXO3a. J Hematol Oncol. 2018 Jan 24;11(1):12. doi: 10.1186/s13045-018-0555-y .B1
