流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry）是一種廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究和臨床診斷的技術(shù)，它可以對(duì)液流中的單細(xì)胞進(jìn)行快速懂盐、準(zhǔn)確的定性和定量分析褥赊。在流式細(xì)胞儀中，樣品被引入細(xì)胞通道莉恼，單個(gè)細(xì)胞通過(guò)激光束時(shí)拌喉，激光與細(xì)胞相互作用，產(chǎn)生多個(gè)散射光和熒光信號(hào)俐银，這些信號(hào)被收集并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)尿背，然后通過(guò)電子學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行放大、處理和分析捶惜。
通過(guò)使用不同的熒光染料或熒光標(biāo)記抗體田藐，可以對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記物、細(xì)胞內(nèi)容物吱七、細(xì)胞活性等多個(gè)參數(shù)進(jìn)行測(cè)量汽久，這使得研究人員能夠確定不同類(lèi)型的細(xì)胞、細(xì)胞亞群或細(xì)胞狀態(tài)踊餐。流式細(xì)胞分選已被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)景醇、細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)吝岭、血液學(xué)等領(lǐng)域三痰，隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的發(fā)展吧寺，以及研究維度的精細(xì)化需求，流式分選與單細(xì)胞測(cè)序的結(jié)合也將愈發(fā)緊密散劫。
我們將流式分選方法簡(jiǎn)單分為特異性直標(biāo)抗體分選和自發(fā)熒光分選兩種稚机，它們?cè)谀繕?biāo)細(xì)胞標(biāo)記和分選原理上有所不同。
特異性直標(biāo)抗體分選
原理：選擇與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合的直標(biāo)熒光抗體获搏，將待分選的細(xì)胞樣品與熒光標(biāo)記抗體一起孵育赖条，使抗體與細(xì)胞表面抗原特異性結(jié)合，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)相應(yīng)的熒光信號(hào)來(lái)識(shí)別和分選颜凯。
特異性直標(biāo)抗體分選案例：小鼠-心臟-CD45分選
自發(fā)熒光分選
原理：通過(guò)基因工程技術(shù)使樣本目的基因上融合熒光蛋白基因谋币，如GFP/RFP基因等仗扬，流式細(xì)胞儀通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)自發(fā)產(chǎn)生的熒光信號(hào)來(lái)識(shí)別和分選症概，這種方法適用于那些已經(jīng)被轉(zhuǎn)基因表達(dá)熒光蛋白的細(xì)胞或組織。
自發(fā)熒光分選案例：陽(yáng)性細(xì)胞
如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟?b>研究沒(méi)有特異性細(xì)胞表面標(biāo)志物的細(xì)胞類(lèi)型早芭，通過(guò)自發(fā)熒光分選得到目的細(xì)胞彼城，進(jìn)行后續(xù)單細(xì)胞測(cè)序，比如分選得到血液中自發(fā)熒光陽(yáng)性細(xì)胞退个、肺組織中的自發(fā)熒光陽(yáng)性細(xì)胞募壕，則可以通過(guò)常規(guī)胞質(zhì)內(nèi)的熒光蛋白表達(dá)，實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞的分選语盈。
01 樣本類(lèi)型——分群明顯
空白組為野生型小鼠舱馅，未做特殊處理，明確不帶熒光刀荒；實(shí)驗(yàn)組為GFP組代嗤，帶自發(fā)熒光；流式分析可見(jiàn)明顯分群缠借。
02 樣本類(lèi)型——分群不明顯
此類(lèi)流式樣本存在一定比例的假陽(yáng)性干毅、假陰性，需要科研人員對(duì)于實(shí)驗(yàn)熟悉程度高泼返，可指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員共同進(jìn)行圈門(mén)操作硝逢。
03 樣本類(lèi)型——熒光丟失型
實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的熒光強(qiáng)度幾乎無(wú)差別，實(shí)驗(yàn)組發(fā)生了熒光淬滅等現(xiàn)象绅喉。
自發(fā)熒光分選案例：陽(yáng)性細(xì)胞核
如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟?b>研究酶解較難得到且特殊關(guān)注的細(xì)胞類(lèi)型渠鸽，通過(guò)組織抽核后分選熒光蛋白陽(yáng)性的細(xì)胞核，用于后續(xù)單細(xì)胞測(cè)序柴罐，比如腦徽缚、脊髓等神經(jīng)元細(xì)胞的自發(fā)熒光陽(yáng)性細(xì)胞，植物特殊細(xì)胞類(lèi)型等丽蝎，這種情況建議基因編輯時(shí)熒光蛋白帶核定位信息猎拨，即熒光蛋白在核內(nèi)存在膀藐，從而實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞核的分選。
01 文獻(xiàn)案例——小鼠腸道神經(jīng)元細(xì)胞核
02 文獻(xiàn)案例——小鼠腦神經(jīng)元細(xì)胞核
03 文獻(xiàn)案例——植物特殊細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞核
自發(fā)熒光分選-單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)總結(jié)
