@e6b267452967 我的是移碼突變
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應谒麦，并且每個sgRNA的效率都不一樣的，因此在做正式實驗之前哆致，我們要驗證sgRNA的效率绕德，之后優(yōu)中選優(yōu)。還是那句話摊阀，同樣的目的...
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@47d051d67d1b 如果是我的話耻蛇，我會先查文獻踪蹬，在文獻中能有答案。同時有一個叫做depmap的網站臣咖，你可以去下載里面的數據來進行查詢跃捣。不過一般還是看文獻哦。如果從未有記錄夺蛇，從未有報道的話疚漆。你可以嘗試查查有沒有這個細胞的全基因組測序數據，下載下來自己分析刁赦，或者全外顯子測序也可以娶聘。如果都沒有，那你可以：1. 自己送WGS/WES測序甚脉；2. 自己PCR這段序列丸升，送桑格測序。其余辦法我尚未想到牺氨，希望能幫到你发钝。
細胞周期學習筆記，越想簡單波闹，卻越復雜的一次學習
看文獻的時候發(fā)現很多細胞周期的內容酝豪，因此想要簡單了解一下細胞周期的內容，但是當我開始看相關內容時精堕，發(fā)現內容越來越復雜孵淘。若只是了解細胞周期的大概分布不算什么，最重要的是該了解細...
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@金牛座_14dd 不好意思歹篓，這個超出了我的經驗范圍瘫证，我不是很懂呢，不好意思哦~
終于把CRISPR-Cas9基因編輯系統這篇文章看完個大概了庄撮。
Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system 這篇文章真的看了好久背捌，就算一開始秉承著不求甚解的精神都看不下去，有太多的專業(yè)背...
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@VvO 其實我可能不太清楚你的操作是什么，因為我是轉入到細胞中，在細胞中完成切割吃媒，然后提取gDNA進行PCR，把PCR產物跑膠么抗，切膠回收之后再做切割活性檢測，就是T7EI酶切實驗亚铁。
不知道你的操作過程是否跟我的一樣蝇刀，如果是一樣的，DNA模板是PCR切膠回收過后的徘溢，比較純并且量也大吞琐，不太可能會出現消失的情況哦捆探。CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應，并且每個sgRNA的效率都不一樣的站粟，因此在做正式實驗之前黍图，我們要驗證sgRNA的效率，之后優(yōu)中選優(yōu)卒蘸。還是那句話，同樣的目的...
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@e6b267452967 不好意思這是我很久之前查的翻默，圖中截圖就是我在該公司截的缸沃，但是具體哪個公司忘了，現在再搜索我也搜索不到了修械，只看到abcam有一株：Human PTEN knockout A549 cell line (ab286704) 顯示19 bp deletion趾牧。或許像你說的那樣肯污，曾經公司標注翘单，之后取消了這些信息呢。
CRISPR-Cas9基因編輯1--背景介紹及gRNA設計（上）
簡介和前期文章 我對之前的所有教程進行了再次詳細的總結 前言： 每當我們接觸新事物時蹦渣，都忍不住問如下圖所示之哲學三問（當然有時候問的是哄芜，這是什么？可以吃嗎柬唯？怎么做认臊？）： 由于...
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@VvO 其實我在做sgRNA體外活性驗證的時候也遇到過很低的條帶，原因就是可能off-target很多锄奢，并且造成了很多種切割結果失晴，導致條帶彌散。最好還是一次多試幾個sgRNA拘央，這樣能盡量選擇合意的涂屁，以免后面白做，畢竟我們做一次不容易啊灰伟。希望能幫到你拆又。
CRISPR-Cas9基因編輯不只是剪開DNA這么簡單
前言 我只是搬運工，這部分內容我參考的內容有：CRISPR Editing is All About DNA Repair MechanismsCRISPR-guideMME...
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@98cb69c247f1 直接跑哦栏账，不需要過濾哦~
CRISPR-Cas9基因編輯4--確定Cas9質粒構建成功+漂亮的質粒轉染
簡介和前期文章 我對之前的所有教程進行了再次詳細的總結CRISPR-Cas9基因編輯之背景介紹及gRNA設計（上）[http://www.reibang.com/p/e5c...
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一文解決Cellphonedb單細胞互作分析及可視化作圖（1）CellPhoneDB作為出鏡率很高的細胞互作分析工具遏乔，也是大家公認的。網上有很多教程发笔，按理說在自己單細胞系列也應該出一個教程盟萨，但是由于CellPhoneDB是基于pytho...
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細胞間通訊教程|| cellphonedb 及其可視化細胞配受體通識以及常見細胞分泌信號通路[http://www.reibang.com/p/df4721d29a91]CellChat：細胞間相互作用分析利器[https:/...
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@一直在努力的科研小白 沒有特殊加什么，就是10% FBS的1640了讨，我們組養(yǎng)細胞連雙抗偶讀不加捻激，或許你還要查查有無支原體污染之類的制轰。我們THP-1狀態(tài)是比較不錯的
CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（6）正式轉染+單克隆細胞篩選
前期記錄 先確定目標基因CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（1）然后對目的基因進行背景調查CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（2）磨刀不誤砍柴工設計sgRNA及引...
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@一直在努力的科研小白 由于我沒養(yǎng)過這個巨噬細胞，所以不是特別了解胞谭。不過首先要確定你敲除的這個基因不會影響細胞增殖垃杖，不是一個生存必須的基因。其次只能說擴大實驗范圍丈屹，我們課題組在挑THP-1單克隆的小伙伴也表示這個細胞一個96孔板挑下來也只能挑到十個左右而已调俘，看來這個細胞本身個頭就是特別小又很脆弱的樣子呢。
CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（6）正式轉染+單克隆細胞篩選
前期記錄 先確定目標基因CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（1）然后對目的基因進行背景調查CRISPR/Cas9基因敲除實驗全記錄（2）磨刀不誤砍柴工設計sgRNA及引...
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@RAVEN_9dc5 有可能哦~
不想再用慢病毒了旺垒，我還有什么別的選擇嗎彩库？piggyBac transposon
慢病毒可快速、高效的將目的基因整合到宿主細胞基因組先蒋，非常適合用于構建穩(wěn)轉細胞株骇钦。但慢病毒也有缺點，即使是穩(wěn)轉細胞株竞漾，可能會隨著傳代次數的增加而慢慢丟失干擾或者過表達的效率眯搭。其...
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@梁蛋蛋 太辛苦了~終于可以開始啦~~~！Ｒ邓辍Ａ巯伞！恭喜恭喜１适薄７痹！糊闽！
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術哪家強
前言： 挑選到滿意的sgRNA之后梳玫，就要開始正式實驗，而正式實驗中細胞轉染部分我則不會再講右犹，直接到最關鍵的部分：挑取單克隆提澎。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑、儀器：轉染試...
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@實驗小菜雞 如果你的敲除成功是片段變小的話念链，那300-400處沒有條帶盼忌，可能提示sgRNA活性不夠。
CRISPR-Cas9基因編輯5--不可或缺的sgRNA活性預實驗
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脫靶效應掂墓，并且每個sgRNA的效率都不一樣的谦纱，因此在做正式實驗之前，我們要驗證sgRNA的效率君编，之后優(yōu)中選優(yōu)跨嘉。還是那句話，同樣的目的...
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@梁蛋蛋 太可憐了吃嘿，啥細胞呀祠乃，不好養(yǎng)活嗎梦重？
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術哪家強
前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗亮瓷，而正式實驗中細胞轉染部分我則不會再講琴拧，直接到最關鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑嘱支、儀器：轉染試...
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@梁蛋蛋 密度高一點試試蚓胸，T25太大了，不如就用六孔板養(yǎng)著除师，平時普通的實驗沛膳，六孔板也夠了
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術哪家強
前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗馍盟，而正式實驗中細胞轉染部分我則不會再講于置，直接到最關鍵的部分：挑取單克隆茧吊。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑贞岭、儀器：轉染試...
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@b2e3219b1c5d 如果不長的話，直接找公司合成吧搓侄，同源重組也有錯配的瞄桨，好大一番動靜下來，還不一定能做出來呢讶踪。如果你的定點附近有一些酶切位點芯侥，我覺得可以用Gibson assembly的方法來完成。你在snap gene里面可以直接設計的乳讥。至于你老師說的那種有很長同源臂的同源重組柱查，這個同源臂你也得合成，然后加入到外源基因2的質粒上云石，你還要構建非常久的質粒唉工。時間上劃不來，還是覺得你直接合成這段融合基因序列汹忠，也不會太費錢淋硝。
CRISPR-Cas9基因編輯4--確定Cas9質粒構建成功+漂亮的質粒轉染
簡介和前期文章 我對之前的所有教程進行了再次詳細的總結CRISPR-Cas9基因編輯之背景介紹及gRNA設計（上）[http://www.reibang.com/p/e5c...
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@多多 可以多培養(yǎng)幾天喲
CRISPR-Cas9基因編輯6--挑單克隆技術哪家強
前言： 挑選到滿意的sgRNA之后，就要開始正式實驗宽菜，而正式實驗中細胞轉染部分我則不會再講谣膳，直接到最關鍵的部分：挑取單克隆。 實驗正文 1. 實驗準備 常規(guī)試劑铅乡、儀器：轉染試...